Hotstart Taq DNA Polymerase
Hot Start Taq DNA Polymerase (Antibody modification) Thermus aquaticus YT-1 مان هڪ گرم شروع ٿيندڙ Thermostable DNA پوليمريز آهي، جنهن ۾ 5′→3′ پوليمريز سرگرمي ۽ 5′ → فليپ انڊونيڪليز سرگرمي آهي.گرم شروع ٿيندڙ Taq DNA پوليمريز هڪ Taq DNA پوليمريز آهي جنهن کي thermolabile Taq اينٽي باڊيز ذريعي تبديل ڪيو ويو آهي.اينٽي باڊي ترميمي پي سي آر جي خاصيت، حساسيت، ۽ پيداوار وڌائي.
اجزاء
| جزو | HC1012A-01 | HC1012A-02 | HC1012A-03 | HC1012A-04 |
| 5×HC تاق بفر | 4 × 1 ايم ايل | 4 × 10 ايم ايل | 4 × 50 ايم ايل | 5 × 400 ايم ايل |
| گرم شروع ٽائيڪ ڊي اين اي پوليميرس (اينٽي باڊي تبديل ٿيل) (5 U/μL) | 0.1 ايم ايل | 1 ايم ايل | 5 ايم ايل | 10 × 5 ايم ايل |
درخواستون
10 mM Tris-HCl (pH 7.4 at 25℃)، 100 mM KCl، 0.1 mM EDTA، 1 mM dithiothreitol، 0.5% Tween20، 0.5% IGEPALCA-630 ۽ 50% گليسرول.
رکڻ جي حالت
0 ° C کان هيٺ ٽرانسپورٽ ۽ محفوظ ڪيو وڃي -25 ° C ~ -15 ° C.
يونٽ جي تعريف
ون يونٽ انزائم جي مقدار طور بيان ڪيو ويو آهي جيڪو 15 nmol dNTP کي 75 ° C تي 30 منٽن ۾ تيزاب ۾ حل نه ٿيندڙ مواد ۾ شامل ڪري ٿو.
معيار تي ضابطو
1.Endonuclease سرگرمي:4 μg pUC19 DNA سان 20 U جي اينزيم کي 4 ڪلاڪن لاءِ 37 ℃ تي انڪيوبيشن ڪرڻ جي نتيجي ۾ ڊي اين اي جي ڪا به دريافت نه ٿي سگھي جيڪا جيل الیکٹروفورسس پاران طئي ڪئي وئي آهي.
2.5 kb Lambda PCR:200 µM dNTPs ۽ 0.2 µM پرائمر جي موجودگي ۾ Taq DNA Polymerase جي 1.25 يونٽن سان 5 ng Lambda DNA جي PCR امپليفڪيشن جا 25 سائيڪلون 5 kb پراڊڪٽ جي توقع جي نتيجي ۾.
3.Exonuclease سرگرمي:هڪ 50 µl رد عمل جو انڪيوبيشن جنهن ۾ گهٽ ۾ گهٽ 12.5 U Taq DNA Polymerase 10 nmol 5´-FAM oligonucleotide سان 30 منٽن لاءِ 37℃ تي ڪا به سڃاڻپ نه ٿي سگهي.
4.RNase سرگرمي:10 µL رد عمل جو انڪيوبيشن جنهن ۾ 20 U اينزائم شامل آهن 1μg آر اين اي ٽرانسڪرپٽس سان 2 ڪلاڪن تائين 37°C تي 37 ڊگري سينٽي گريڊ تي RNA جي ڪنهن به قسم جي خرابي جي نشاندهي نه ڪئي وئي جيئن جيل الیکٹروفورسس پاران طئي ٿيل آهي.
5.گرمي جي غير فعال ٿيڻ:نه.
رد عمل سسٽم
| اجزاء | حجم |
| ٽيمپليٽ ڊي اين ايa | اختياري |
| 10 μM فارورڊ پرائمر | 0.5 μL |
| 10 μM ريورس پرائمر | 0.5 μL |
| ڊي اين ٽي پي مکس (هر هڪ 10 ايم ايم) | 0.5 μL |
| 5×HC تاق بفر | 5 μL |
| تاڪ ڊي اين اي پوليمريزب(5U/μL) | 0.125 μL |
| نيوڪليس کان پاڪ پاڻي | 25 μL تائين |
نوٽس:
1) هڪ.
| ڊي اين اي | رقم |
| جينومڪ | 1 ng-1 μg |
| پلازميڊ يا وائرل | 1 pg-1 ng |
2) ب.Taq DNA Polymerase جو وڌ کان وڌ ڪنسنٽريشن 5-50 يونٽس/mL (0.1-0.5 يونٽس/25 µL رد عمل) تائين ٿي سگھي ٿو خاص ايپليڪيشنن ۾.
حرارتي سائيڪلنگ پروٽوڪول
پي سي آر
| قدم | گرمي پد(°C) | وقت | سائيڪلون |
| شروعاتي تباهيa | 95 ℃ | 1-3 منٽ | - |
| رد ڪرڻ | 95 ℃ | 15-30 ايس | 30-35 سائيڪلون |
| اينيلنگب | 45-68 ℃ | 15-60 ايس | |
| واڌارو | 68 ℃ | 1kb/منٽ | |
| فائنل توسيع | 68 ℃ | 5 منٽ | - |
نوٽس:
1) 95 ° C تي 1 منٽ جي شروعاتي ڊينيچريشن تمام گهڻيون واڌارن لاءِ ڪافي آهي.مشڪل ٽيمپليٽس لاءِ، 95 ° C تي 2-3 منٽ جي ڊگھي ڊنيٽوريشن جي سفارش ڪئي وئي آهي.ڪالوني پي سي آر سان، 95 ° C تي شروعاتي 5 منٽن جي خراب ٿيڻ جي سفارش ڪئي وئي آهي.
2) annealing قدم عام طور تي 15-60 s آهي.اينيلنگ جي درجه حرارت پرائمر جوڙي جي Tm تي ٻڌل آهي ۽ عام طور تي 45-68 ℃ آهي.
