ريناس کي روڪڻ وارو
Murine RNase inhibitor هڪ recombinant murine RNase inhibitor جو اظهار ڪيو ويو آهي ۽ E.coli کان پاڪ آهي.اهو RNase A, B يا C سان 1: 1 جي تناسب ۾ غير covalent بانڊنگ ذريعي جڙي ٿو، ان ڪري ٽن اينزائمز جي سرگرمي کي روڪي ٿو ۽ آر اين اي کي تباهي کان بچائي ٿو.بهرحال، اهو RNase 1، RNase T1، S1 Nuclease، RNase H يا Aspergillus کان RNase جي خلاف اثرائتو ناهي.Murine RNase inhibitor RT-PCR، RT-qPCR ۽ IVT mRNA پاران آزمائشي ڪئي وئي، ۽ مختلف تجارتي ريورس ٽرانسپيسس، ڊي اين اي پوليميريسس ۽ آر اين اي پوليميريسس سان مطابقت هئي.
انساني RNase inhibitors جي مقابلي ۾، murine RNase inhibitor ۾ ٻه cysteines شامل نه هوندا آهن جيڪي آڪسائيڊشن لاءِ انتهائي حساس هوندا آهن جن جي ڪري روڪيندڙ جي غير فعال ٿيڻ جو سبب بڻجندو آهي.انهي کي ڊي ٽي ٽي (1 ايم ايم کان گهٽ) جي گهٽ ڪنسنٽريشن تي مستحڪم بڻائي ٿي.هي خصوصيت ان کي رد عمل ۾ استعمال ڪرڻ لاءِ موزون بڻائي ٿي جتي ڊي ٽي ٽي جي وڏي مقدار رد عمل جي خلاف آهي (مثال طور حقيقي وقت RT-PCR).
Aدرخواست
هي پراڊڪٽ وڏي پيماني تي ڪنهن به تجربي ۾ استعمال ٿي سگهي ٿو جتي RNase مداخلت ممڪن آهي RNA جي تباهي کان بچڻ لاء، جهڙوڪ:
1.cDNA، RT-PCR، RT-qPCR، وغيره جي پهرئين اسٽرينڊ جو سنٿيسس.
2.ويٽرو ٽرانسپشن/ترجمي دوران آر اين اي کي تباهي کان بچائي ٿو (مثال طور، ويٽرو وائرل ريپليڪشن سسٽم ۾).
3.آر اين اي جي علحدگي ۽ صاف ڪرڻ دوران RNase سرگرمي جي نمائش.
اسٽوريج جون حالتون
پيداوار -25～-15 ℃ تي محفوظ ڪري سگهجي ٿو، 2 سالن لاءِ صحيح.
اسٽوريج بفر
50 mM KCl، 20 mM HEPES-KOH (pH 7.6، 25 ℃)، 8 mM DTT ۽ 50% گليسرول.
يونٽ جي تعريف
5 اين جي ribonuclease A جي سرگرمي کي 50٪ تائين روڪڻ لاءِ گهربل مورين RNase inhibitor جي مقدار کي ون يونٽ (U) طور بيان ڪيو ويو.
پروٽين جو ماليڪيولر وزن
murine RNase inhibitor جو ماليڪيولر وزن 50 kDa آهي.
معيار تي ضابطو
Exonuclease سرگرمي:
40 U جي murine RNase inhibitor سان 1 μg λ -Hind III ڊيجسٽ ڊي اين اي 37℃ تي 16 ڪلاڪن تائين ڪا به خرابي پيدا نه ٿي ڪري جيئن ايگرز جيل الیکٹروفورسس پاران طئي ٿيل آهي.
Endonuclease سرگرمي:
40 U of murine RNase inhibitor 1μg λ DNA سان 37℃ تي 16 ڪلاڪن تائين ڪا به خرابي پيدا نه ٿيندي جيئن ايگرز جيل الیکٹروفورسس پاران طئي ٿيل آهي.
نڪڻ سرگرمي:
1μg pBR322 سان 1μg pBR322 جو 40U 37℃ تي 16 ڪلاڪن لاءِ ڪا به خرابي پيدا نه ڪندو آهي جيئن ايگرز جيل الیکٹروفورسس پاران طئي ٿيل آهي.
RNase سرگرمي:
40U جي murine RNase inhibitor 1.6μg MS2 RNA سان 4h لاءِ 37℃ تي ڪا به خرابي پيدا نه ٿيندي جيئن ايگرز جيل الیکٹروفورسس پاران طئي ٿيل آهي.
E.ڪولي ڊي اين اي:
40 U جي murine RNase inhibitor E. coli genomic DNA جي موجودگي لاءِ اسڪريننگ ڪئي وئي آهي TaqMan qPCR استعمال ڪندي پرائمر سان E. coli 16S rRNA لوڪس لاءِ مخصوص.E. coli جينومڪ ڊي اين اي آلودگي ≤ 0.1 pg/40 U آهي.
Nاوٽs
1. پرتشدد اوسيليشن يا ڇڪڻ اينزيم جي غير فعال ٿيڻ جو سبب بڻجندو.
2. هن inhibitor جي وڌ ۾ وڌ درجه حرارت جي حد 25-55 ℃ هئي، ۽ اهو 65 ℃ ۽ مٿي تي غير فعال هو.
3.RNase H، RNase 1 ۽ RNase T1 جون سرگرميون مورين RNase inhibitor پاران منع ٿيل نه هيون.
4. RNase سرگرمي جي روڪٿام پي ايڇ جي وسيع رينج ۾ مليا (پي ايڇ 5-9 سڀ سرگرم هئا)، ۽ سڀ کان وڌيڪ سرگرمي پي ايڇ 7-8 تي ڏٺو ويو.
5. جيئن ته رائبونيوڪليز عام طور تي رد ڪرڻ واري حالتن ۾ سرگرمي کي برقرار رکندا آهن، ان ڪري احتياط سان ورتو وڃي ته جيئن RNase Inhibitor ماليڪيولز کي رد ڪرڻ کان پاسو ڪجي جيڪي ريبونيڪليز سان پيچيده ٿي ويا آهن.فعال ريبونيڪليز جي ڇڏڻ کي روڪڻ لاء، گرمي پد 50 ° C کان وڌيڪ ۽ يوريا يا ٻين خراب ڪرڻ واري ايجنٽ جي وڏي مقدار کان بچڻ گهرجي.
