پروٽينين ڪي (ليوفيلائيز پائوڊر)
ٻلي نمبر: HC4500A
Proteinase K وسيع ذيلي ذخيري جي خاصيت سان هڪ مستحڪم سيرين پروٽيز آهي.اهو مقامي رياست ۾ ڪيترن ئي پروٽينن کي خراب ڪري ٿو جيتوڻيڪ صابن جي موجودگي ۾.ڪرسٽل ۽ ماليڪيولر ڍانچي جي مطالعي مان ثبوت ظاهر ڪن ٿا ته اينزيم جو تعلق سبٽيليسين خاندان سان آهي جنهن ۾ هڪ فعال سائيٽ ڪيٽيليٽڪ ٽريڊ (Asp39-هن جي69- سر224).ڪليويج جو مکيه ماڳ پيپٽائيڊ بانڊ آهي جيڪو ڪاربوڪسائل گروپ جي الفا امينو گروپن سان گڏ aliphatic ۽ aromatic amino acids جي ڀرسان آهي.اهو عام طور تي ان جي وسيع لاء استعمال ڪيو ويندو آهيخاصيت.
اسٽوريج جون حالتون
2-8 ℃ مختصر مدت اسٽوريج، -25 ~ -15 ℃ ڊگھي مدت اسٽوريج.سڪل پائوڊر جي حيثيت -25~-15℃ 3 سالن لاء صحيح؛اينزيم پائوڊر کي مناسب مقدار ۾ ڦهلائڻ گهرجي.
تفصيل
| ظاهر | سفيد کان آف-سفيد بيڪار ليوفيلائيز پائوڊر |
| سرگرمي | ≥30 U/mg |
| ڊي نيس | ڪو به نه مليو |
| RNase | ڪو به نه مليو |
ملڪيتون
| اي سي نمبر | 3.4.21.64 (Tritirachium البم کان ٻيهر ٺهندڙ) |
| ماليڪيولر وزن | 29 kDa (SDS-PAGE) |
| Isoelectric پوائنٽ | 7.81 |
| وڌ ۾ وڌ پي ايڇ | 7.0-12.0 تصوير.1 |
| وڌ ۾ وڌ درجه حرارت | 65 ℃ تصوير.2 |
| pH استحڪام | pH 4.5-12.5 (25℃، 16h) تصوير.3 |
| حرارتي استحڪام | هيٺيون 50℃(pH 8.0, 30min) تصوير.4 |
| چالو ڪندڙ | SDS، يوريا |
| Inhibitors | Diisopropyl fluorophosphate؛phenylmethylsulfonyl fluoride |
درخواستون
1. جينياتي تشخيصي کٽ
2. آر اين اي ۽ ڊي اين اي ڪڍڻ واري کٽ
3. بافتن مان غير پروٽين جي اجزاء جو اخراج، پروٽين جي ناپاڪيءَ جو خاتمو، جهڙوڪ ڊي اين اي ويڪسينز ۽ هيپرين جي تياري.
4. pulsed electrophoresis ذريعي ڪروموزوم ڊي اين اي جي تياري
5. مغربي ڦوٽو
6. ويٽرو تشخيص ۾ اينزيميٽڪ گلائڪوسيلٽيڊ البومن ريجنٽس
اپاءُ
حفاظتي دستانو ۽ چشما پائڻ وقت استعمال ڪريو يا وزن ڪريو، ۽ استعمال کان پوء چڱي طرح هوادار رکو.هي پراڊڪٽ شايد چمڙي جي الرجڪ رد عمل ۽ سنگين اکين جي جلن جو سبب بڻائين.جيڪڏهن ساهه کنيو وڃي ته اهو ٿي سگهي ٿو الرجي يا دمما جي علامات يا dyspnea.سانس جي جلن جو سبب ٿي سگھي ٿو.
Assay
يونٽ جي تعريف
ون يونٽ (U) جي وضاحت ڪئي وئي آهي اينزيم جي مقدار کي هائيڊولائيز ڪرڻ لاءِ ڪيسين کي 1 μmol tyrosine في منٽ پيدا ڪرڻ لاءِ هيٺين حالتن هيٺ.
Reagents جي تياري
ريجنٽ I: 1g کير جي ڪيسين کي 50ml 0.1M سوڊيم فاسفيٽ محلول (pH 8.0) ۾ گھليو ويو، 65-70 ℃ پاڻيءَ ۾ 15 منٽ لاءِ انڪيوب ڪيو ويو، ٿلھي ۽ گھليو ويو، پاڻيءَ سان ٿڌو ڪيو ويو، سوڊيم ھائيڊروڪسائيڊ سان ترتيب ڏنل pH 8.0، ۽ فڪس حجم 100 ملي.
ريجنٽ II: 0.1M trichloroacetic acid، 0.2M sodium acetate، 0.3M acetic acid.
ريجنٽ III: 0.4M Na2CO3حل.
ريجنٽ IV: Forint reagent 5 ڀيرا خالص پاڻي سان ملائي.
ريجنٽ V: اينزيم ڊيلوئنٽ: 0.1M سوڊيم فاسفٽ حل (pH 8.0).
ريجنٽ VI: ٽائروسائن جو حل: 0، 0.005، 0.025، 0.05، 0.075، 0.1، 0.25 umol/ml ٽائروسين 0.2M HCL سان حل ڪيو ويو.
طريقو
1. 0.5ml reagent I کي 37 ℃ تي اڳي گرم ڪيو وڃي ٿو، 0.5ml اينزيم جو حل شامل ڪريو، چڱي طرح ملايو، ۽ 10 منٽ لاءِ 37 ℃ تي انڪيوبيٽ ڪريو.
2. رد عمل کي روڪڻ لاءِ 1 ml reagent II شامل ڪريو، چڱيءَ طرح ملايو ۽ 30 منٽن تائين انڪيوبيشن جاري رکو.
3. Centrifugate ردعمل حل.
4. 0.5ml supernatant وٺو، 2.5ml reagent III، 0.5ml reagent IV شامل ڪريو، چڱيءَ طرح ملايو ۽ 37 ℃ تي 30 منٽ لاءِ سيپ ڪريو.
5. او ڊي660OD طور مقرر ڪيو ويو1؛خالي ڪنٽرول گروپ: 0.5ml reagent V استعمال ڪيو ويندو آهي OD کي طئي ڪرڻ لاءِ اينزيم حل کي تبديل ڪرڻ لاءِ660OD جي طور تي2، ΔOD=OD1-او ڊي2.
6. L-tyrosine معياري وکر: 0.5mL مختلف ڪنسنٽريشن L tyrosine حل، 2.5mL ريجنٽ III، 0.5mL ريجنٽ IV 5mL سينٽرفيوج ٽيوب ۾، 37 ℃ ۾ 30 منٽ لاءِ انڪيوبيٽ ڪريو، OD لاءِ پتو لڳايو660L-tyrosine جي مختلف ڪنسنٽريشن لاءِ، پوءِ حاصل ڪيو معياري وکر Y=kX+b، جتي Y آھي L-tyrosine ڪنسنٽريشن، X آھي OD600.
حساب ڪتاب
2: رد عمل جي حل جو ڪل مقدار (ايم ايل)
0.5: اينزيم حل جو مقدار (ايم ايل)
0.5: رد عمل مائع حجم ڪروموجنڪ عزم ۾ استعمال ڪيو ويو (ايم ايل)
10: رد عمل جو وقت (منٽ)
Df: Dilution گھڻن
C: اينزيم ڪنسنٽريشن (mg/mL)
حوالا
1. ويگر يو اينڊ هلز ايڇ ايف بي ايس ليٽ.(1972)؛ 23:77.
2. ويگر يو اينڊ هلز ايڇ بايوڪيم.بائيوفيس.Res.ڪميون.(1971)؛ 44:513.
3. هلز، ايڇ.۽ ٻيا.،يورو.جي بايوڪيم.(1975)؛ 56:103-108.
4. سامبروڪ جيet ال.، ماليڪيولر ڪلوننگ: هڪ ليبارٽري مينوئل، ٻيو ايڊيشن، کولڊ اسپرنگ هاربر ليبارٽري پريس، کولڊ اسپرنگ هاربر (1989).
تصوير 2 بهترين درجه حرارت
20 ايم ايم ڪ-فاسفيٽ بفر پي ايڇ 8.0 ۾ رد عمل.Enzyme ڪنسنٽريشن: 1mg/mL
تصوير 3 پي ايڇ استحڪام
25℃، 16 ايڇ-علاج 50 ايم ايم بفر حل سان: پي ايڇ 4.5-5.5، ايڪٽيٽ؛پي ايڇ 6.0-8.0، نا-فاسفيٽ؛pH 8.0-9.0، Tris-ايڇ سي ايل.پي ايڇ 9.0-12.5، گليسائن-NaOH.Enzyme ڪنسنٽريشن: 1mg/mL
تصوير 4 حرارتي استحڪام
30 منٽ-علاج 50mm Tris-HCL بفر سان، pH 8.0.Enzyme ڪنسنٽريشن: 1mg/mL
تصوير 5 اسٽوريج استحڪامty at 25 ℃
