DNase I (Rnase Free) (5u/ul)
ٻلي نمبر: HC4007A
DNase I (Deoxyribonuclease I) هڪ endodeoxyribonuclease آهي جيڪو هضم ڪري سگهي ٿو اڪيلو يا ٻٽي-اسٽرينڊ ڊي اين اي.اهو 5'-ٽرمينل تي فاسفيٽ گروپن سان monodeoxynucleotides يا واحد- يا ڊبل-stranded oligodeoxynucleotides پيدا ڪرڻ لاءِ فاسفوڊائيسٽر بانڊن کي سڃاڻي ٿو ۽ ان کي صاف ڪري ٿو ۽ 3'-ٽرمينل تي هائيڊروڪسيل.DNase I جي سرگرمي Ca تي منحصر آهي2+۽ divalent metal ions جي ذريعي چالو ڪري سگھجي ٿو جهڙوڪ Mn2+۽ Zn2+.5 ايم ايم Ca2+اينزيم کي هائڊروليسس کان بچائيندو آهي.جي موجودگي ۾ Mg2+، اينزيم بي ترتيب طور سڃاڻي سگهي ٿو ۽ ڪنهن به سائيٽ کي ڊي اين اي جي ڪنهن به اسٽينڊ تي صاف ڪري سگهي ٿو.Mn جي موجودگي ۾2+، ڊي اين اي جي ٻٽي تارن کي هڪ ئي وقت سڃاڻي سگهجي ٿو ۽ لڳ ڀڳ هڪ ئي سائيٽ تي ڪليو ڪري سگهجي ٿو فليٽ انڊ ڊي اين اي جا ٽڪرا يا 1-2 نيوڪليوٽائڊس جي پکڙيل چپچپا آخري ڊي اين اي جا ٽڪرا.
اجزاء
| نالو | 0.1KU | 1KU | 5 KU | 50 KU |
| DNase I، RNase آزاد | 20μL | 200μL | 1 ايم ايل | 10 ملي |
| 10×DNase I بفر | 1 ايم ايل | 1 ايم ايل | 5 × 1 ايم ايل | 5 × 10 ايم ايل |
اسٽوريج حالتون
-25℃~-15℃ رکڻ لاءِ؛آئس پيڪ تحت ٽرانسپورٽ.
هدايتون
1. هيٺ ڏنل تناسب مطابق RNase-free ٽيوب ۾ رد عمل جو حل تيار ڪريو:
| جزو | حجم |
| آر اين اي | ايڪس µg |
| 10 × DNase I بفر | 1μL |
| DNase I، RNase-free (5U/μL) | 1 U في µg RNA① |
| ڊي ايڇ2O | 10μL تائين |
نوٽ: ① DNase I جي مقدار کي ڳڻيو جيڪو RNA جي مقدار جي بنياد تي شامل ڪرڻ جي ضرورت آھي.
2. 15 منٽن لاء 37 ℃؛
3. 0.5M EDTA کي 2.5mM~5mM جي آخري ڪنسنٽريشن ۾ شامل ڪريو، ۽ رد عمل کي روڪڻ لاءِ 10 منٽن لاءِ 65℃ تي گرم ڪريو.نموني سڌو سنئون ايندڙ رد عمل لاء استعمال ڪري سگھجي ٿو جهڙوڪ ريورس ٽرانسپشنتجربو.
يونٽ جي تعريف
ون يونٽ کي اينزيم جي مقدار طور بيان ڪيو ويو آهي جيڪو مڪمل طور تي 1µg pBR322 کي ختم ڪري ڇڏيندو.ڊي اين اي 10 منٽن ۾ 37 ℃ تي.
معيار تي ضابطو
RNase:DNase I جو 5U 1.6µg MS2 RNA سان 4 ڪلاڪن لاءِ 37℃ تي ڪا به خرابي پيدا نه ٿينديagarose gel electrophoresis جي ذريعي مقرر.
نوٽس
1. مھرباني ڪري 0.5MEDTA پاڻ تيار ڪريو.
2. استعمال ڪريو 1U DNase I في µg RNA جي.بهرحال، جيڪڏهن آر اين اي 1µg کان گهٽ آهي، مهرباني ڪري 1U DNase I استعمال ڪريو.
3. مھرباني ڪري آپريشن دوران اينزيم کي برف تي رکو.
