سپر اسٽارٽ qPCR پريمڪس پلس-UNG
ٻلي نمبر: HCB5071E
Superstart qPCR Premix plus-UNG ھڪڙو خاص ريگينٽ آھي جيڪو ريئل ٽائيم پي سي آر جي معيار ۽ مقدار جي رد عمل لاءِ تيار ڪيو ويو آھي پروب بيسڊ ڊيڪشن استعمال ڪندي، خاص طور تي لائو فلائيزيشن جي عملن لاءِ تيار ڪيو ويو آھي.اهو هڪ ناول هاٽ اسٽارٽ اينزائم Hotstart Taq plus (DG) تي مشتمل آهي، جنهن جي Taq اينزائم سرگرمي کي ڪمري جي حرارت تي سيل ڪيو ويو آهي، مؤثر طريقي سان غير مخصوص ايمپليفڪيشن کي روڪي ٿو جيڪو پرائمر جي غير مخصوص اينيلنگ يا پرائمر ڊائمر ٺهڻ جي ڪري گهٽ درجه حرارت جي حالتن ۾، اهڙي طرح بهتر ٿي سگهي ٿو. amplification ردعمل جي خاصيت.هي ريجنٽ استعمال ڪري ٿو هڪ بهتر ڪيل qPCR مخصوص بفر ۽ UNG/dUTP مخالف آلودگي وارو نظام تيز گرم شروع ڪرڻ لاءِ ، تمام گهڻو بهتر ڪري ٿو qPCR رد عمل جي ڪارڪردگي ۽ حساسيت کي.اهو مقدار جي علائقن جي وسيع رينج ۾ سٺو معياري وکر حاصل ڪري سگهي ٿو ۽ صحيح طور تي مقدار کي انجام ڏئي سگهي ٿو، مؤثر طريقي سان غلط مثبت واڌ کي روڪيو وڃي ٿو بقايا پي سي آر پروڊڪٽس يا ايروسول آلودگي جي ڪري.هي ريجنٽ ٺاهيندڙن جي اڪثر فلورسنٽ مقداري پي سي آر اوزارن سان مطابقت رکي ٿو جهڙوڪ اپلائيڊ بايو سسٽم، ايپينڊورف، بايو-راڊ ۽ روچ وغيره، ۽ لائوفيلائز فارم ۾ سٺي استحڪام ڏيکاري ٿو.
Reagent ساخت
1. 5×HotstartPremix پلس-UNG (Mg2+مفت) (ڊي جي)
2. 250 ايم ايم ايم جي سي ايل2
3. 4 × لائيوپروٽيڪنٽ (اختياري)
اسٽوريج جون حالتون
-20 ℃ تي ڊگهي-مدت رکڻ؛4 ℃ تي 3 مهينن تائين محفوظ ڪري سگھجي ٿو.استعمال ڪرڻ کان اڳ چڱي طرح ملايو ۽بار بار منجمد ۽ پگھلڻ کان بچڻ.
سائيڪلنگ پروٽوڪول
| طريقو | عارضي. | وقت | سائيڪل |
| هضم | 50 ℃ | 2 منٽ | 1 |
| Polymerase چالو ڪرڻ | 95 ℃ | 1 ~ 5 منٽ | 1 |
| ڏند ڪٿا | 95 ℃ | 10 ~ 20 سيڪنڊ | 40-50 |
| انيلنگ ۽ توسيع | 56 ~ 64 ℃ | 20 ~ 60 سيڪنڊ | 40-50 |
qPCR Liquid Reaction Syاسٽيم جي تياري
|
بناوت |
25µL حجم |
50µL حجم |
آخري ڪنسنٽريشن |
| 5×HotstartPremix پلس-UNG(ايم جي2+مفت) (ڊي جي) | 5µL | 10µL | 1× |
| 250 ايم ايم ايم جي سي ايل2 | 0.45µL | 0.9µL | 4.5 ايم ايم |
| 4 × لائيوپروٽيڪنٽ1 | 6.25µL | 12.5µL | 1× |
| 25×Primer-Probe Mix2 | 1µL | 2µL | 1× |
| ٽيمپليٽ ڊي اين اي3 | —— | —— | —— |
| ڊي ايڇ2O | 25µL تائين | 50µL تائين | —— |
1. پرائمر لاءِ 0.2μM جي آخري ڪنسنٽريشن عام طور تي سٺا نتيجا ڏئي ٿي.جڏهن رد عمل جي ڪارڪردگي خراب آهي، ضرورت مطابق 0.2-1μM جي حد اندر پرائمر ڪنسنٽريشن کي ترتيب ڏيو.پروب ڪنسنٽريشن کي عام طور تي 0.1-0.3μM جي حد جي اندر بهتر ڪيو ويندو آهي گريڊيئينٽ تجربن ذريعي بهتر مجموعن کي ڳولڻ لاءِ.
2. مختلف قسم جي ٽيمپليٽس ۾ موجود ٽارگيٽ جين جو نقل نمبر مختلف ٿي سگھي ٿو؛جيڪڏهن ضروري هجي ته، بهتر نموني اضافي رقم جو تعين ڪرڻ لاءِ تدريسي ڊيليشن کي انجام ڏئي سگهجي ٿو.
3. هن نظام lyophilized ڪري سگهجي ٿو;جڏهن گراهڪ هن سسٽم کي منجهيل خشڪ ڪرڻ جي ضرورتن کان سواءِ استعمال ڪندا آهن، 4×لائوپروٽيڪنٽ چونڊيل طور شامل ڪري سگھجن ٿا؛ جيڪڏهن منجهيل خشڪ پراڊڪٽ گهربل آهن، مائع ريجينٽ اسٽيج پراڊڪٽ جي ڪارڪردگي جي تصديق دوران، ان کي لازمي طور تي 4 × لائوپروٽيڪنٽ شامل ڪرڻ گهرجي ته جيئن لائوفيلائيز سسٽم جي اجزاء سان مطابقت کي يقيني بڻائي سگهجي. ۽ اثرات.
جڏهن سسٽم استعمال ڪيو وڃيd منجمد خشڪ ڪرڻ لاء، تيار ڪريو سسٽم as هيٺين:
| بناوت | 25µL رد عمل سسٽم |
| 5 × HotstartPremix پلس-UNG (Mg2+مفت) (ڊي جي) | 5µL |
| 250 ايم ايم ايم جي سي ايل2 | 0.45µL |
| 4 × لائيوپروٽيڪنٽ | 6.25µL |
| 25×Primer-Probe Mix | 1µL |
| ڊي ايڇ2O | 18 ~ 20µL تائين |
* جيڪڏهن منجمد خشڪ ڪرڻ لاء ٻيا سسٽم گهربل آهن، مهرباني ڪري الڳ الڳ صلاح ڪريو.
Lyophilization عملss
| طريقو | عارضي. | وقت | حالت | دٻاءُ |
| پري منجمد ٿيڻ | 4 ℃ | 30 منٽ | رکو |
1 ايم |
| -50 ℃ | 60 منٽ | کولڻ | ||
| -50 ℃ | 180 منٽ | رکو | ||
| پرائمري خشڪ ڪرڻ | -30 ℃ | 60 منٽ | گرمائش |
آخري ويڪيوم |
| -30 ℃ | 70 منٽ | رکو | ||
| ثانوي خشڪ ڪرڻ | 25 ℃ | 60 منٽ | گرمائش |
آخري ويڪيوم |
| 25 ℃ | 300 منٽ | رکو |
2. مٿين lyophilization عمل صرف حوالي لاء آهي.مختلف پراڊڪٽ جا قسم ۽ مختلف فريز ڊرائر جا مختلف پيٽرول آهن، تنهنڪري ترتيب ڏئي سگهجي ٿي اصل مطابقاستعمال دوران حالتون.
3. مختلف lyophilization عمل lyophilized جي مختلف بيچ سائز لاء مناسب ٿي سگهي ٿوپروڊڪٽس، تنهنڪري ڪافي جانچ جي تصديق ٿيڻ گهرجي جڏهن وڏي پيماني تي پيداوار لاء استعمال ڪيو وڃي.
lyophilize استعمال ڪرڻ لاء هدايتونڊي پائوڊر
1. مختصر طور تي ليوفيلائيز پائوڊر سينٽرفيوج؛
2. لائوفيلائيز پائوڊر ۾ نيوڪليڪ ايسڊ ٽيمپليٽ شامل ڪريو ۽ 25µL تائين پاڻي شامل ڪريو؛
3. centrifugation ذريعي چڱيءَ طرح ملايو ۽ مشين تي هلايو.
معيار تي ضابطو:
1. فنڪشنل جاچ: حساسيت، خاصيت، qPCR جي ٻيهر پيداوار.
2. نڪي خارجي نيوڪليز سرگرمي، نڪي خارجي انڊو/exonuclease آلودگي.
ٽيڪنيڪل ڄاڻ:
1. Superstart qPCR Premix plus-UNG استعمال ڪري ٿو ھڪڙو ناول ھوٽ اسٽارٽ اينزائم جيڪو 1~5 منٽن اندر تيز ھوٽ-شروع ڪرڻ جي قابل بڻائي ٿو.خاص بفر فارموليشن ذريعي اهو ملٽي پلڪس فلورسنٽ مقداري PCR رد عمل لاءِ موزون آهي.
2. ان ۾ اعلي خصوصيت آهي جيڪا خاص طور تي فلوروسينس مقدار جي PCR حد جي چڪاس جي حساسيت کي بهتر بڻائي ٿي، ايمپليفڪيشن وکر کي عام ڪرڻ، فلوروسينس قدر گهٽ ڪنسنٽريشن ٽيمپليٽس تي واضح بهتري حاصل ڪري ٿي، مناسب اعلي حساسيت فلوروسينس مقداري پي سي آر ڊيٽيشن ريجينٽ جي طور تي.
3. پرائمر لاءِ گھٽ اينيلنگ جي گرمي پد سان يا 200bp کان وڌيڪ ٽڪرا، 3-قدم طريقو سفارش ڪئي وئي آھي.
4. dUTP جي استعمال جي ڪارڪردگي ۽ UNG اينزيم جي حساسيت مختلف ٽارگيٽ جين لاء مختلف آهي، اهڙيء طرح جيڪڏهن UNG سسٽم استعمال ڪندي پتو لڳائڻ جي حساسيت ۾ گهٽتائي ٿي، ردعمل سسٽم کي ترتيب ڏيڻ ۽ بهتر ڪرڻ گهرجي.جيڪڏهن ٽيڪنيڪل سپورٽ گهربل آهي مهرباني ڪري اسان جي ڪمپني سان رابطو ڪريو.
5. ايمپليفڪيشن کان اڳ ۽ پوءِ وقف ٿيل علائقن ۽ پائپن جو استعمال ڪريو، آپريشن دوران دستانا پائڻ ۽ انهن کي بار بار مٽايو؛پي سي آر مڪمل ٿيڻ کان پوءِ رد عمل واري ٽيوب کي نه کوليو پي سي آر پروڊڪٽس پاران نمونن جي آلودگي کي گھٽ ڪرڻ لاءِ.
