بي ايس آءِ
BsaI، هڪ IIs پابندي endonuclease پابندي endonuclease، arecombinant E. coli strain مان نڪتل آهي جيڪو ڪلون ٿيل ۽ تبديل ٿيل BsaI جين کي Bacillus stearothermophilus مان کڻندو آهي. جنهن جي ساڳي خاصيت آهي جيئن ڏيهي اينزيم ۽ گهٽجي ويل اسٽار سرگرمي.ان جي سڃاڻپ جو سلسلو ۽ خال خال جڳهيون هن ريت آهن:
5'······GGTCTC(N)···········3'
3'······CCAG(NNNNN)···5'
اجزاء
BsaI (20U/μL)، 10xBsaI بفر
ذخيرو
اسٽور ڪريو -25℃~-15℃، صحيح 1 سال لاءِ (بار بار منجمد ٿيڻ واري چڪر کان پاسو ڪريو).
اسٽوريج بفر
10mm Tris-HCl، 200mm NaCl، 1mm DTT 0.1mm EDTA، 200µg/ml Recombinant Albumin، 50% گليسرول.(pH 7.4 @ 25°C).
پيداوار جون خاصيتون
اعلي سرگرمي، تيز هضم؛
1. گھٽ اسٽار سرگرمي، صحيح ڪٽڻ کي يقيني بڻائڻ جهڙوڪ "اسڪيلپل"؛
2. بغير BSA ۽ جانور جي اصليت کان سواء.
ميٿيلائيشن حساسيت
ڊيم ميٿيليشن: حساس ناهي؛
ڊي سي ايم ميٿيليشن: اوورليپنگ جي ڪجهه مجموعن کان متاثر ٿيل؛
سي پي جي ميٿيليشن: اوورليپنگ جي ڪجهه مجموعن طرفان بند ٿيل.
يونٽ جي تعريف
ھڪڙي يونٽ جي وضاحت ڪئي وئي آھي 1 µg اندروني ڪنٽرول ڊي اين اي کي ھضم ڪرڻ لاءِ 1 ڪلاڪ اندر 37 ° C تي 50 µL جي ڪل رد عمل واري مقدار ۾.
معيار تي ضابطو
پروٽين جي صفائي جو جائزو (SDS-PAGE): Bsa I جي پاڪائي ≥ 95٪ مقرر ڪئي وئي SDS-PAGE تجزيي ذريعي Coomassie Blue detection استعمال ڪندي.
RNase:Bsa I جو 20 U 1.6 μg MS2 RNA سان 16 ڪلاڪ لاءِ 37 ℃ حاصل ڪري ٿو نوڊيگريڊيشن جيڪي ايگرز جيل الیکٹروفورسس پاران طئي ٿيل آهن.
غير مخصوص DNase سرگرمي:20 Uof BsaI 1 μg PhiX174 DNA سان 16 ڪلاڪن لاءِ 37 ℃ تي ڪو به وڌيڪ ڊي اين اي حاصل نٿو ڪري جيئن ايگرز جيل الیکٹروفورسس پاران طئي ڪيو ويو آهي.
پابندي ۽ بحالي:1 μg جي هضم ٿيڻ کان پوء
E.coli DNA:2Uof VacciniavirusCapping Enzyme E. coli genomic DNA جي موجودگي لاءِ اسڪريننگ ڪئي وئي آهي TaqManqPCR استعمال ڪندي پرائمر سان E. coli 16S rRNA لوڪس لاءِ مخصوص.E. coli genomic DNA آلودگي ≤1 E. coli جينوم آهي.
بيڪٽيريل اينڊوٽوڪسين:LAL-ٽيسٽ، چيني فارماڪوپيياIV2020 ايڊيشن جي مطابق، جيل جي حد ٽيسٽ جو طريقو، عام اصول (1143).بيڪٽيريل اينڊوٽوڪسين جو مواد هجڻ گهرجي ≤10 EU/mg.
رد عمل جو نظام ۽ حالتون
| جزو | حجم |
| BsaI (20 U/μL) | 1μL |
| ڊي اين اي | 1μg |
| 10 x BsaI بفر | 5μL |
| dd H2O | 50 μL تائين |
15-30 منٽن لاء 37 ° C تي incubate.گرمي غير فعال ٿيڻ: 80 ° C 20 منٽ لاء.
تجويز ڪيل رد عمل سسٽم ۽ حالتون نسبتا سٺو اينزيم هضمي اثر مهيا ڪري سگھن ٿيون، جيڪو صرف حوالو ڏيڻ لاء، مهرباني ڪري تفصيل لاء تجرباتي نتيجن کي ڏسو.
درخواستون
پابندي اينزيم هضم فاسٽ ڪلوننگ.
استعمال تي نوٽس
1. رد عمل جي مقدار جو اينزيم ≤ 1 / 10 جو حجم.
2. Staractivity mayoccurwhenglycerol ڪنسنٽريشن 5٪ کان وڌيڪ آهي.
3. Cleavageactivity ٿي سگھي ٿي جڏھن Substrate ھيٺ ڏنل تناسب.
