گرمي پد حساس UNG
Temperature Sensitive UNG (TS-UNG) E. coli ۾ recombinant اظهار ذريعي حاصل ڪيل آهي.اينزائيم uracil تي مشتمل واحد ۽ ٻٽي-اسٽرينڊ ڊي اين اي مان آزاد uracil جي آزاديء کي متحرڪ ڪري ٿو ۽ آر اين اي جي خلاف غير فعال آهي.E. coli gene origin جي روايتي UNG enzyme جي مقابلي ۾، TS-UNG اينزيم کي گھٽ درجه حرارت (20 ℃ ~ 37 ℃) تي وڌيڪ سرگرمي آهي ۽ درجه حرارت حساس ۽ آساني سان غير فعال (50 ℃) آهي، dUTP تي مشتمل ايمپليفڪيشن جي تباهي کان بچڻ. پروڊڪٽس ڪمري جي گرمي پد تي رهائش واري سرگرمي جي ڪري جيڪي روايتي UNG اينزيم جي غير فعال ٿيڻ کان پوء رهي سگهن ٿيون.تنهن ڪري، TS-UNG enzyme نه رڳو PCR آلودگي جي روڪٿام جي رد عمل لاءِ موزون آهي، پر RT-PCR امپليفڪيشن پروگرام سان به چڱيءَ طرح ملندو آهي ۽ RT-PCR آلودگي جي روڪٿام واري رد عمل ۾ استعمال ڪري سگهجي ٿو.
تجويز ڪيل درخواست
آلودگي جي روڪٿام وڌائڻ
رکڻ جي حالت
-20 ° C ڊگھي مدت جي اسٽوريج لاء، استعمال ڪرڻ کان اڳ چڱي طرح ملايو وڃي، بار بار منجمد ٿيڻ کان بچڻ.
اسٽوريج بفر
20 mM Tris-HCl (pH 7.5)، 100 mM NaCl، 0.1 mM EDTA، 1 mM DTT، اسٽيبلائزر، 50٪ گليسرول.
يونٽ جي تعريف
37°C تي 1 ڪلاڪ اندر dU بيسز تي مشتمل 1µg سنگل اسٽرينڊ ڊي اين اي کي ختم ڪرڻ لاءِ گهربل اينزيم جو مقدار 1 يونٽ سرگرمي (U) آهي.
معيار تي ضابطو
1.SDS-PAGE electrophoretic پاڪائي 98٪ کان وڌيڪ
2.تباهي واري سرگرمي، بيچ کان بيچ ڪنٽرول، استحڪام
3.ڪابه خارجي نيوڪليز سرگرمي ناهي، نڪي خارجي انڊونيڪليز يا exonuclease آلودگي.
هدايتون
| اجزاء | حجم (μL) | آخري ڪنسنٽريشن |
| 10 × PCR بفر (dNTP مفت، Mg²+واندو) | 5 | 1× |
| dUTPs (dCTP، dGTP، dATP) | - | 200 μM |
| dUTP (dTTP کي تبديل ڪريو) | - | 200-600 μM |
| 25 mM MgCl2 | 2-8 μL | 1-4 ايم ايم |
| 5 U/μL تاق | 0.25 | 1.25 يو |
| 1 U/μLTS-UNG | 0.5 (0.1-0.5) | 0.5 يو (0.1-0.5U) |
| 25 × پرائمر ميڪسهڪ | 2 | 1× |
| سانچو | - | 1μg/رد عمل |
| ddH₂O | 50 تائين | - |
نوٽ: الف: جيڪڏهن استعمال ڪيو وڃي qPCR/qRT-PCR لاءِ، فلورسنٽ پروب کي رد عمل واري نظام ۾ شامل ڪيو وڃي.عام طور تي، 0.2 μM جي آخري پرائمر ڪنسنٽريشن سٺا نتيجا ڏئي سگھن ٿا؛جڏهن رد عمل جي ڪارڪردگي خراب آهي، پرائمر ڪنسنٽريشن کي 0.2-1 μM جي حد ۾ ترتيب ڏئي سگهجي ٿو.عام طور تي، جاچ ڪنسنٽريشن 0.1-0.3 μM جي حد ۾ بهتر ڪئي وئي آهي.پرائمر ۽ پروب جو بهترين ميلاپ ڳولڻ لاءِ ڪنسنٽريشن گريڊينٽ تجربا ڪري سگهجن ٿا.
نوٽس
1.TS-UNG اينزيم جي بهترين ردعمل جي درجه حرارت نسبتا گهٽ آهي، ۽ اهو 20 ℃ ~ 37 ℃ جي حد ۾ بهتر ٿي سگهي ٿو، اينزيم جي دوز ۽ رد عمل جو وقت 0.1 ~ 0.5 U، 5 ~ جي حد ۾ بهتر ٿي سگهي ٿو. 10 منٽ؛۽ اينزيم کي ريورس ٽرانسپشن جي عمل ۾ غير فعال ٿي سگهي ٿو.
2.اهو آلودگي کي روڪڻ لاء PCR ۽ RT-PCR لاء مناسب آهي.
3.بار بار منجمد ٿيڻ کان پاسو ڪريو، ۽ وڏي درجه حرارت جي ڦيرڦار کي بي نقاب نه ڪريو.
4.مختلف جين کي وڌايو وڃي ٿو DUTP جي مختلف استعمال جي ڪارڪردگي ۽ UNG اينزيم کي حساسيت، تنهن ڪري، جيڪڏهن UNG سسٽم جي استعمال سان تشخيص جي حساسيت ۾ گهٽتائي ٿئي ٿي، ردعمل سسٽم کي ترتيب ڏيڻ ۽ بهتر ڪرڻ گهرجي، جيڪڏهن توهان کي ٽيڪنيڪل سپورٽ جي ضرورت آهي، مهرباني ڪري رابطو ڪريو. اسان جي ڪمپني.
