يونيورسل SYBR گرين qPCR پريمڪس (نيرو)
ٻلي نمبر: HCB5041B
يونيورسل بليو qPCR ماسٽر مڪس (ڊائي بيسڊ) 2×حقيقي وقت جي مقداري پي سي آر ايمپليفڪيشن لاءِ اڳواٽ حل آهي جنهن جي خصوصيت اعليٰ حساسيت ۽ خاصيت سان آهي، رنگ ۾ نيرو آهي، ۽ نموني اضافي ٽريڪنگ جو اثر آهي.بنيادي جزو Taq DNA پوليمريس اينٽي باڊي گرم شروع کي استعمال ڪري ٿو غير مخصوص ايمپليفيڪيشن کي مؤثر طور تي روڪڻ لاءِ نموني جي تياري دوران پرائمر اينيلنگ جي ڪري.ساڳئي وقت، فارمولا پي سي آر جي رد عمل جي افاديت جي ڪارڪردگي کي بهتر ڪرڻ ۽ مختلف GC مواد (30 ~ 70٪) سان جين جي واڌ کي برابر ڪرڻ لاءِ پروموشنل عنصر شامل ڪري ٿو، انهي ڪري ته مقداري پي سي آر هڪ وسيع مقدار ۾ سٺو لڪير تعلق حاصل ڪري سگهي ٿو. علائقوهي پراڊڪٽ خاص ROX Passive Reference Dye تي مشتمل آهي، جيڪو اڪثر qPCR آلات تي لاڳو ٿئي ٿو.اهو ضروري ناهي ته مختلف اوزارن تي ROX جي ڪنسنٽريشن کي ترتيب ڏيو.اهو صرف ضروري آهي ته پرائمر ۽ ٽيمپليٽ شامل ڪرڻ لاء ردعمل سسٽم کي وڌائڻ لاء تيار ڪرڻ لاء.
اجزاء
يونيورسل بليو qPCR ماسٽر ميڪس
اسٽوريج حالتون
پيداوار آئس پيڪ سان موڪليو ويو آهي ۽ محفوظ ڪري سگهجي ٿو -25 ℃ ~ -15 ℃ 18 مهينن لاءِ.اهو ضروري آهي ته مضبوط روشني جي شعاع کان بچڻ لاء جڏهن ردعمل سسٽم کي محفوظ ڪرڻ يا تيار ڪرڻ.
تفصيل
| توجهه | 2× |
| معلوم ڪرڻ جو طريقو | SYBR |
| پي سي آر جو طريقو | qPCR |
| پوليمريز | تاڪ ڊي اين اي پوليمريز |
| نموني جو قسم | ڊي اين اي |
| ايپليڪيشن جو سامان | اڪثر qPCR اوزار |
| پيداوار جو قسم | SYBR پريمڪس حقيقي وقت فلوروسينس مقدار جي PCR لاءِ |
| لاڳو ڪريو (درخواست) | جين جو اظهار |
هدايتون
1. رد عمل جو نظام
| اجزاء | حجم (μL) | حجم (μL) | آخري ڪنسنٽريشن |
| يونيورسل SYBR گرين qPCR پريمڪس | 25 | 10 | 1× |
| فارورڊ پرائمر (10μmol/L) | 1 | 0.4 | 0.2μmol/L |
| ريورس پرائمر (10μmol/L) | 1 | 0.4 | 0.2μmol/L |
| ڊي اين اي | X | X | |
| ڊي ايڇ2O | 50 تائين | 20 تائين | - |
[نوٽ]: استعمال ڪرڻ کان اڳ چڱيءَ طرح ملايو ته جيئن زوردار ٿڌڻ کان وڌيڪ بلبلن کان بچڻ لاءِ.
الف) پرائمر ڪنسنٽريشن: فائنل پرائمر ڪنسنٽريشن 0.2μmol/L آهي، ۽ 0.1 ۽ 1.0μmol/L جي وچ ۾ به ترتيب ڏئي سگهجي ٿو جيئن مناسب هجي.
ب) ٽيمپليٽ ڪنسنٽريشن: جيڪڏهن ٽيمپليٽ غير ملائي سي ڊي اين اي اسٽاڪ حل آهي، استعمال ٿيل حجم qPCR رد عمل جي ڪل مقدار جي 1/10 کان وڌيڪ نه هجڻ گهرجي.
ج) ٽيمپليٽ ڊيليوشن: سي ڊي اين اي اسٽاڪ حل کي 5-10 ڀيرا گھٽائڻ جي صلاح ڏني وئي آهي.شامل ڪيل ٽيمپليٽ جي وڌ کان وڌ مقدار بهتر آهي جڏهن ايمپليفڪيشن ذريعي حاصل ڪيل Ct قدر 20-30 چڪر آهي.
d) رد عمل جو نظام: اهو 20μL يا 50μL استعمال ڪرڻ جي سفارش ڪئي وئي آهي ته جيئن ٽارگيٽ جين امپليڪشن جي اثرائتي ۽ ورجائي کي يقيني بڻائي سگهجي.
e) سسٽم جي تياري: مھرباني ڪري سپر صاف بينچ ۾ تيار ڪريو ۽ نيوڪليز ريزيڊيو کانسواءِ ٽوپس ۽ رد عمل واري ٽيوب استعمال ڪريو؛اهو فلٽر ڪارٽريز سان ٽوٽڪا استعمال ڪرڻ جي صلاح ڏني آهي.پار آلودگي ۽ ايروسول آلودگي کان بچاء.
2.رد عمل پروگرام
معياري پروگرام
| سائيڪل قدم | عارضي. | وقت | سائيڪلون |
| شروعاتي تباهي | 95 ℃ | 2 منٽ | 1 |
| رد ڪرڻ | 95 ℃ | 10 سيڪنڊ | 40 |
| اينيلنگ / توسيع | 60 ℃ | 30 سيڪنڊ★ | |
| پگھلڻ واري وکر اسٽيج | اوزار ڊفالٽ | 1 | |
جلدي پروگرام
| سائيڪل قدم | عارضي. | وقت | سائيڪلون |
| شروعاتي تباهي | 95 ℃ | 30 سيڪنڊ | 1 |
| رد ڪرڻ | 95 ℃ | 3 سيڪنڊ | 40 |
| اينيلنگ / توسيع | 60 ℃ | 20 سيڪنڊ★ | |
| پگھلڻ واري وکر اسٽيج | اوزار ڊفالٽ | 1 | |
[نوٽ]: فاسٽ پروگرام جينز جي وڏي اڪثريت لاءِ موزون آهي، ۽ انفرادي پيچيده ثانوي ڍانچي جين لاءِ معياري پروگرام آزمائي سگهجن ٿا.
a) annealing گرمي پد ۽ وقت: مھرباني ڪري پرائمر ۽ ٽارگيٽ جين جي ڊيگهه مطابق ترتيب ڏيو.
ب) فلورسنس سگنل حاصل ڪرڻ (★): مھرباني ڪري اوزار جي استعمال لاءِ هدايتون ۾ ڏنل ضرورتن مطابق تجرباتي طريقيڪار کي سيٽ ڪريو.
ج) پگھلڻ وارو وکر: اوزار ڊفالٽ پروگرام عام طور تي استعمال ڪري سگھجي ٿو.
3. نتيجن جو تجزيو
گھٽ ۾ گھٽ ٽي حياتياتي نقلن جي ضرورت هئي مقدار جي تجربن لاء.رد عمل کان پوء، amplification وکر ۽ پگھلڻ واري وکر جي تصديق ڪرڻ جي ضرورت آهي.
3.1 وڌائڻ وارو وکر:
معياري واڌارو وکر S-شڪل آهي.مقداري تجزيا سڀ کان وڌيڪ صحيح هوندا آهن جڏهن Ct جي قيمت 20 ۽ 30 جي وچ ۾ اچي ٿي. جيڪڏهن Ct جي قيمت 10 کان گهٽ آهي، اهو ضروري آهي ته ٽيمپليٽ کي ختم ڪيو وڃي ۽ ٻيهر ٽيسٽ ڪيو وڃي.جڏهن Ct قدر 30-35 جي وچ ۾ آهي، اهو ضروري آهي ته ٽيمپليٽ ڪنسنٽريشن يا رد عمل واري نظام جي مقدار کي وڌايو وڃي، جيئن ته وڌائڻ جي ڪارڪردگي کي بهتر بڻائي سگهجي ۽ نتيجن جي تجزيو جي درستگي کي يقيني بڻائي سگهجي.جڏهن Ct قدر 35 کان وڌيڪ آهي، امتحان جا نتيجا مقداري طور تي جين جي اظهار جو تجزيو نٿا ڪري سگهن، پر معيار جي تجزيي لاءِ استعمال ٿي سگهن ٿا.
3.2 پگھلڻ وارو وکر:
پگھلڻ واري وکر جي واحد چوٽي اشارو ڪري ٿي ته رد عمل جي خاصيت سٺي آهي ۽ مقداري تجزيي کي انجام ڏئي سگهجي ٿو؛جيڪڏهن پگھلڻ وارو وکر ٻيڻو يا گھڻن چوٽي ڏيکاري ٿو، مقداري تجزيو انجام نه ٿو ڏئي سگھجي.پگھلڻ وارو وکر ڊبل چوٽي ڏيکاري ٿو، ۽ اهو فيصلو ڪرڻ ضروري آهي ته غير ٽارگيٽ چوٽي پرائمر ڊيمر آهي يا غير مخصوص ايمپليفڪيشن ڊي اين اي ايگرز جيل الیکٹروفورسس ذريعي.جيڪڏهن اهو هڪ پرائمر ڊيمر آهي، اهو سفارش ڪئي وئي آهي ته پرائمر ڪنسنٽريشن کي گھٽايو وڃي يا پرائمر کي ٻيهر ڊزائين ڪرڻ جي اعلي ڪارڪردگي ڪارڪردگي سان.جيڪڏھن اھو غير مخصوص واڌارو آھي، مھرباني ڪري اينيلنگ جي گرمي پد کي وڌايو، يا خاصيت سان پرائمر کي ٻيهر ٺاھيو.
نوٽس
مهرباني ڪري توهان جي صحت ۽ حفاظت کي يقيني بڻائڻ لاءِ ضروري پي پي اي، جهڙوڪ ليبارٽري ڪوٽ ۽ دستانو پائڻ!
هي پراڊڪٽ صرف تحقيق جي استعمال لاء آهي!
