رنس اي
Ribonuclease A (RNaseA) هڪ واحد اسٽرينڊ پوليپيپٽائيڊ آهي جنهن ۾ 4 ڊسلفائيڊ بانڊ شامل آهن جن جو ماليڪيولر وزن اٽڪل 13.7 kDa آهي.RNase A هڪ Endoribonuclease آهي جيڪو خاص طور تي سي ۽ يو جي باقيات تي واحد-اسٽريٽڊ آر اين اي کي خراب ڪري ٿو.خاص طور تي، خال خال 5′-ribose جي nucleotide جي 5′-ribose ۽ 3′-ribose جي ڀرسان pyrimidine nucleotide تي فاسفيٽ گروپ پاران ٺهيل فاسفوڊيسٽر بانڊ کي سڃاڻي ٿو، انهي ڪري ته 2، 3′-سائڪليڪ فاسفوڊيسٽر بانڊ کي 3′-سائڪليڪ هائيڊرولائيزڊائڊس سان گڏ ڪيو ويو آهي. نيوڪليو سائڊ فاسفيٽس (مثال طور pG-pG-pC-pA-pG کي RNase A ذريعي صاف ڪيو ويندو آهي pG-pG-pCp ۽ A-PG پيدا ڪرڻ لاءِ).RNase A واحد-stranded RNA کي صاف ڪرڻ ۾ سڀ کان وڌيڪ سرگرم آهي.تجويز ڪيل ڪم ڪنسنٽريشن 1-100μG/mL آهي، مختلف ردعمل سسٽم سان هم آهنگ.گھٽ لوڻ جو ڪنسنٽريشن (0-100 mM NaCl) استعمال ڪري سگھجي ٿو سنگل اسٽرينڊڊ آر اين اي، ڊبل اسٽرينڊڊ آر اين اي، ۽ آر اين اي زنجيرن کي ڪٽڻ لاءِ جيڪو RNA-DNA ھائبرائڊائيزيشن ذريعي ٺاھيو ويو آھي.جڏهن ته، اعلي لوڻ جي ڪنسنٽريشن تي (≥0.3 M)، RNase A صرف خاص طور تي واحد-Stranded RNA کي صاف ڪري ٿو.
RNase A عام طور تي پلازميڊ ڊي اين اي يا جينومڪ ڊي اين اي جي تياري دوران آر اين اي کي هٽائڻ لاءِ استعمال ڪيو ويندو آهي. تياري جي عمل دوران ڊي اين اي فعال هجي يا نه هجي آساني سان رد عمل کي متاثر ڪري سگهي ٿو.پاڻي جي غسل ۾ ابلڻ جو روايتي طريقو DNase سرگرمي کي غير فعال ڪرڻ لاء استعمال ڪري سگھجي ٿو.هي پراڊڪٽ DNase ۽ protease تي مشتمل ناهي، ۽ استعمال کان اڳ گرمي علاج جي ضرورت ناهي.ان کان علاوه، هي پراڊڪٽ ماليڪيولر حياتيات جي تجربن ۾ پڻ استعمال ڪري سگهجي ٿو جهڙوڪ RNase تحفظ جي تجزيي ۽ آر اين اي ترتيب تجزيي.
اسٽوريج جون حالتون
پيداوار -25～-15℃ تي محفوظ ڪري سگهجي ٿو، 2 سالن لاءِ صحيح.
هدايتون
هي RNase A اسٽوريج حل تيار ڪرڻ لاء عام طريقن مان هڪ آهي.اهو پڻ تيار ڪري سگهجي ٿوليبارٽري يا ريفرنس لٽريچر ۾ روايتي طريقن جي مطابق ٻيا طريقا (جهڙوڪ10 mM Tris-HCl، pH 7.5 يا Tris-NaCl حل ۾ سڌو سنئون)
1. 10 mg/mL RNase A اسٽوريج حل تيار ڪرڻ لاءِ 10 mM سوڊيم ايڪٽيٽ (pH 5.2) استعمال ڪريو
2. 15 منٽ لاء 100 ℃ تي گرمي
3. ڪمري جي گرمي پد تي ٿڌو، 1 M Tris-HCl (pH 7.4) جو 1/10 حجم شامل ڪريو، ان جي پي ايڇ کي 7.4 تي ترتيب ڏيو (لاءِ)مثال طور، شامل ڪريو 500 ml جو 10g/ml RNase اسٽوريج حل 1M Tris-HCL، PH7.4)
4. منجمد اسٽوريج لاءِ -20 ℃ تي ذيلي پيڪيج، جيڪو 2 سالن تائين مستحڪم ٿي سگهي ٿو.
[نوٽ]: جڏهن غير جانبدار حالتن ۾ RNaseA حل کي ابلايو ويندو، RNase ورن ٺاهي ويندي؛ان کي گهٽ پي ايڇ تي اڇو، ۽ جيڪڏهن ورن آهي، اهو مشاهدو ڪري سگهجي ٿو، جيڪو پروٽين جي تڪليف جي موجودگي جي ڪري ٿي سگهي ٿو.جيڪڏهن اُبلڻ کان پوءِ سليمينٽ ملي ٿي، ته تيز رفتار سينٽرفيوگريشن (13000rpm) ذريعي نجاست کي ختم ڪري سگهجي ٿو، ۽ پوءِ منجمد رکڻ لاءِ ذيلي ڀريل.
پيداوار جي ڄاڻ
| مترادفات | ربونوڪليز I؛پينڪريٽڪ ريبونيڪليز؛ربونڪليز 3'-pyrimidnooligonucleotidohydrolase؛رنس اي؛Endoribonulcease I |
| CAS نمبر | 9001-99-4 |
| ظاهر | اڇو lyophilized پائوڊر |
| ماليڪيولر وزن | ~ 13.7kDa (امينو اسيد جي ترتيب) |
| پي ايڇ ويليو | 7.6 (سرگرميءَ جي حد 6-10) |
| مناسب درجه حرارت | 60℃ (سرگرميءَ جي حد 15-70℃) |
| چالو ڪندڙ ايجنٽ | Na2+.ڪي+ |
| روڪڻ وارو | ريناس کي روڪڻ وارو |
| غير فعال ٿيڻ جو طريقو | گرم ڪرڻ سان غير فعال نه ٿو ڪري سگھجي، اهو سينٽرفيوج ڪالمن کي استعمال ڪرڻ جي صلاح ڏني وئي آهي |
| اصليت | بوائن |
| سولائيزيشن | پاڻي ۾ حليل (10mg/ml) |
| خشڪ تي نقصان | ≤5.0% |
| Enzyme سرگرمي | ≥60 Kunitz يونٽ / mg |
| Isoelectric پوائنٽ | 9.6 |
نوٽس
توھان جي حفاظت ۽ صحت لاءِ، مھرباني ڪري آپريشن لاءِ ليبارٽري ڪوٽ ۽ ڊسپوزيبل دستانو پائڻ.
