Robustart Taq DNA Polymerase
Robustart Taq DNA Polymerase ھڪڙو گرم شروع ٿيل ڊي اين اي پوليمريز آھي.هي پراڊڪٽ نه رڳو بهتر طور تي غير مخصوص رد عمل کي روڪي سگھي ٿو پرائمر جي غير مخصوص اينيلنگ يا پي سي آر سسٽم جي تياري ۽ ايمپليفڪيشن جي عمل ۾ پرائمر مجموعي جي ڪري.تنهن ڪري، ان ۾ شاندار خاصيت آهي ۽ گهٽ ڪنسنٽريشن ٽيمپليٽس جي واڌ ويجهه لاءِ وڌيڪ اثرائتو آهي، ۽ اهو ملٽي پلڪس ٿيل پي سي آر امپليڪشن ردعمل لاءِ موزون آهي.ان کان علاوه، هي پراڊڪٽ تمام سٺو قابل اطلاق آهي، ۽ مستحڪم امپلائيشن جا نتيجا مختلف قسم جي PCR رد عمل ۾ حاصل ڪري سگھجن ٿيون.
اجزاء
1.5 U/μL Robustart Taq DNA پوليمريز
2.10 × PCR بفر II (Mg²+ مفت) (اختياري)
3.25 mM MgCl2(اختياري)
* 10 × PCR بفر II (Mg²+ مفت) ۾ dNTP ۽ Mg²+ شامل ناهي، مهرباني ڪري شامل ڪريو dNTPs ۽ MgCl2جڏهن ته رد عمل جي نظام جي تياري.
تجويز ڪيل درخواستون
1.تيز رفتار وڌائڻ.
2.گھڻا واڌارو.
3.رت، swabs، ۽ ٻين نمونن جي سڌي amplification.
4.تنفس جي بيمارين جي تشخيص.
رکڻ جي حالت
-20 ° C ڊگھي مدت جي اسٽوريج لاء، استعمال ڪرڻ کان اڳ چڱي طرح ملايو وڃي، بار بار منجمد ٿيڻ کان بچڻ.
*جيڪڏهن ورن ريفريجريشن کان پوء ٿئي ٿي، اهو عام آهي؛ان کي ملائڻ ۽ استعمال ڪرڻ کان اڳ ڪمري جي حرارت کي برابر ڪرڻ جي صلاح ڏني وئي آهي.
يونٽ جي تعريف
ھڪڙي فعال يونٽ (U) کي انزائيم جي مقدار جي طور تي بيان ڪيو ويو آھي جيڪو 74 ° C تي 74 ° C تي 30 منٽ لاء ايڪٽيويٽ سلمن اسپرم ڊي اين اي کي ٽيمپليٽ/پرائمر طور استعمال ڪندي 10 nmol deoxyribonucleotide کي شامل ڪري ٿو.
معيار تي ضابطو
1.SDS-PAGE electrophoretic purity 98٪ کان وڌيڪ.
2.امپلائيشن حساسيت، بيچ کان بيچ ڪنٽرول، استحڪام.
3.نڪي خارجي نيوڪليز سرگرمي، نڪي خارجي انڊونيڪليز يا خارجي نڪليز آلودگي
هدايتون
رد عمل سيٽ اپ
| اجزاء | حجم (μL) | آخري ڪنسنٽريشن |
| 10 × PCR بفر II (Mg²+ مفت)a | 5 | 1× |
| dNTPs (10mm هر dNTP) | 1 | 200 μM |
| 25 mM MgCl2 | 2-8 | 1-4 ايم ايم |
| Robustart Taq DNA Polymerase (5U/μL) | 0.25-0.5 | 1.25-2.5 يو |
| 25 × پرائمر ميڪسب | 2 | 1× |
| سانچو | - | 1 μg/رد عمل |
| ڊي ايڇ2O | 50 تائين | - |
نوٽس:
1) هڪ.بفر ۾ dNTP ۽ Mg²+ شامل ناهي، مهرباني ڪري dNTPs ۽ MgCl شامل ڪريو2جڏهن ته رد عمل جي نظام جي تياري.
2) ب.جيڪڏهن qPCR/qRT-PCR لاءِ استعمال ڪيو وڃي، فلورسنٽ پروبس کي رد عمل واري نظام ۾ شامل ڪيو وڃي.عام طور تي، 0.2 μM جي آخري پرائمر ڪنسنٽريشن سٺا نتيجا ڏيندو؛جيڪڏهن رد عمل جي ڪارڪردگي خراب آهي، پرائمر ڪنسنٽريشن کي 0.2-1 μM جي حد ۾ ترتيب ڏئي سگهجي ٿو.جاچ ڪنسنٽريشن عام طور تي 0.1-0.3 μM جي حد ۾ بهتر ڪئي وئي آهي.پرائمر ۽ پروب جو بهترين ميلاپ ڳولڻ لاءِ ڪنسنٽريشن گريڊينٽ تجربا ڪري سگهجن ٿا.
حرارتي سائيڪلنگ پروٽوڪول
| باقاعده پي سي آرعمل | |||
| قدم | گرمي پد | وقت | سائيڪلون |
| اڳواٽ ٺهڻ | 95 ℃ | 1-5 منٽ | 1 |
| رد ڪرڻ | 95 ℃ | 10-20 سيڪنڊ | 40-50 |
| اينيلنگ / توسيع | 56-64 ℃ | 20-60 سيڪنڊ | |
| فاسٽ پي سي آرعمل | |||
| قدم | گرمي پد | وقت | سائيڪلون |
| اڳواٽ ٺهڻ | 95 ℃ | 30 سيڪنڊ | 1 |
| رد ڪرڻ | 95 ℃ | 1-5 سيڪنڊ | 40-45 |
| اينيلنگ / توسيع | 56-64 ℃ | 5-20 سيڪنڊ | |
نوٽس
1.تيز ڊي اين اي پوليمريز جي واڌ جي شرح 1 kb/10 s کان گهٽ نه هجڻ گهرجي.گرمي پد جي واڌ ۽ زوال جي شرح، گرمي پد ڪنٽرول موڊ ۽ مختلف پي سي آر آلات جي گرمي جي وهڪري جي ڪارڪردگي تمام گهڻو مختلف آهي، تنهنڪري اهو مخصوص تيز پي سي آر اوزار لاء بهترين رد عمل جي حالتن کي بهتر ڪرڻ جي سفارش ڪئي وئي آهي.
2.سسٽم انتهائي قابل اطلاق آهي، اعلي خاصيت ۽ حساسيت سان.
3.مناسب استعمال لاءِ اعليٰ حساسيت پي سي آر جي چڪاس ريجنٽس، ۽ ملٽي پلڪس پي سي آر امپليڪشن رد عمل ۾ استعمال ڪري سگھجي ٿو.
4.5′→3′ پوليمريز سرگرمي، 5′→3′ exonuclease سرگرمي؛نمبر 3′→5′ exonuclease سرگرمي؛ڪو به پروف ريڊنگ فنڪشن.
5.PCR ۽ RT-PCR جي معيار ۽ مقدار جي جاچ لاءِ مناسب.
6.PCR پراڊڪٽ جو 3′ پڇاڙي A آهي، جنهن کي سڌو سنئون T ویکٹر ۾ ڪلون ڪري سگهجي ٿو.
7.ٽن مرحلن واري طريقي جي سفارش ڪئي وئي آهي پرائمر لاءِ گهٽ اينيلنگ گرمي پد سان يا 200 بي پي کان وڌيڪ ٽڪڙن کي وڌائڻ لاءِ.
