سپر اسٽارٽ ٽائيڪ ڊي اين اي پوليمريز
سپر اسٽارٽ ٽائيڪ ڊي اين اي پوليمريز هڪ گرم شروع ٿيل ڊي اين اي پوليمريز آهي.هي پراڊڪٽ نه رڳو بهتر طور تي غير مخصوص رد عمل کي روڪي سگھي ٿو پرائمر جي غير مخصوص اينيلنگ يا پي سي آر سسٽم جي تياري ۽ ايمپليفڪيشن جي عمل ۾ پرائمر مجموعي جي ڪري.تنهن ڪري، ان کي ڪيترن ئي amplification ۾ بهتر نتيجا حاصل ڪري سگهو ٿا.انهي سان گڏ، اهو اعلي مقدار جي پيداوار حاصل ڪرڻ ۽ وڌيڪ مستحڪم ۽ انتهائي امپلائيشن اثر حاصل ڪرڻ لاء گهٽ ڪنسنٽريشن ٽيمپليٽس جي واڌ کي بهتر ڪري سگهي ٿو.
اجزاء
1.5 U/μL سپر اسٽارٽ ٽائيڪ ڊي اين اي پوليمريز
2.10 × PCR بفر II (Mg²+ مفت) (اختياري)
3.25 mM MgCl2(اختياري)
* 10 × PCR بفر II (Mg²+ مفت) ۾ dNTP ۽ Mg²+ شامل ناهي، مهرباني ڪري شامل ڪريو dNTPs ۽ MgCl2جڏهن ته رد عمل جي نظام جي تياري.
تجويز ڪيل درخواستون
1.افريقي سوائن بخار جي سڃاڻپ.
2.STI جي چڪاس.
3.ملٽي پلڪس وڌائڻ.
رکڻ جي حالت
-20 ° C ڊگھي مدت جي اسٽوريج لاء، استعمال ڪرڻ کان اڳ چڱي طرح ملايو وڃي، بار بار منجمد ٿيڻ کان بچڻ.
*جيڪڏهن ورن ريفريجريشن کان پوء ٿئي ٿي، اهو عام آهي؛ان کي ملائڻ ۽ استعمال ڪرڻ کان اڳ ڪمري جي حرارت کي برابر ڪرڻ جي صلاح ڏني وئي آهي.
يونٽ جي تعريف
ھڪڙي فعال يونٽ (U) کي انزائيم جي مقدار جي طور تي بيان ڪيو ويو آھي جيڪو 74 ° C تي 74 ° C تي 30 منٽ لاء ايڪٽيويٽ سلمن اسپرم ڊي اين اي کي ٽيمپليٽ/پرائمر طور استعمال ڪندي 10 nmol deoxyribonucleotide کي شامل ڪري ٿو.
معيار تي ضابطو
1.SDS-PAGE electrophoretic purity 98٪ کان وڌيڪ.
2.امپلائيشن حساسيت، بيچ کان بيچ ڪنٽرول، استحڪام.
3.نڪي خارجي نيوڪليز سرگرمي، نڪي خارجي انڊونيڪليز يا خارجي نڪليز آلودگي
هدايتون
رد عمل سيٽ اپ
| اجزاء | حجم (μL) | آخري ڪنسنٽريشن |
| 10 × PCR بفر II (Mg²+ مفت)a | 5 | 1× |
| dNTPs (10mm هر dNTP) | 1 | 200 μM |
| 25 mM MgCl2 | 2-8 | 1-4 ايم ايم |
| سپر اسٽارٽ ٽائيڪ ڊي اين اي پوليمريز (5U/μL) | 0.25-0.5 | 1.25-2.5 يو |
| 25 × پرائمر ميڪسب | 2 | 1× |
| سانچو | - | 1 μg/رد عمل |
| ڊي ايڇ2O | 50 تائين | - |
نوٽس:
1) هڪ.بفر ۾ dNTP ۽ Mg²+ شامل ناهي، مهرباني ڪري dNTPs ۽ MgCl شامل ڪريو2جڏهن ته رد عمل جي نظام جي تياري.
2) b.جيڪڏهن qPCR/qRT-PCR لاءِ استعمال ڪيو وڃي، ته فلورسنٽ پروبس کي رد عمل واري نظام ۾ شامل ڪيو وڃي.عام طور تي، 0.2 μM جي آخري پرائمر ڪنسنٽريشن سٺا نتيجا ڏيندو؛جيڪڏهن رد عمل جي ڪارڪردگي خراب آهي، پرائمر ڪنسنٽريشن کي 0.2-1 μM جي حد ۾ ترتيب ڏئي سگهجي ٿو.جاچ ڪنسنٽريشن آهي
3) عام طور تي 0.1-0.3 μM جي حد ۾ بهتر.پرائمر ۽ پروب جو بهترين ميلاپ ڳولڻ لاءِ ڪنسنٽريشن گريڊينٽ تجربا ڪري سگهجن ٿا.
حرارتي سائيڪلنگ پروٽوڪول
| ٻه-قدم عمل | |||
| قدم | گرمي پد | وقت | سائيڪلون |
| اڳواٽ ٺهڻ | 95 ℃ | 1-5 منٽ | 1 |
| رد ڪرڻ | 95 ℃ | 10-20 سيڪنڊ | 35-50 |
| اينيلنگ / توسيع | 56-64 ℃ | 20-60 سيڪنڊ | |
| Tهي- مرحلو عمل | |||
| قدم | گرمي پد | وقت | سائيڪلون |
| اڳواٽ ٺهڻ | 95 ℃ | 1-5 منٽ | 1 |
| رد ڪرڻ | 95 ℃ | 10-20 سيڪنڊ | 35-50 |
| اينيلنگ | 56-64 ℃ | 10-30 سيڪنڊ | |
| واڌارو | 72 ℃ | 10-60 سيڪنڊ | |
نوٽس
1.اهو اپنائڻ ڪري سگهو ٿا 95 ℃ يا 94 ℃، 1 ~ 5 منٽ تيز گرم شروع.
2.سسٽم انتهائي قابل اطلاق آهي، اعلي خاصيت ۽ حساسيت سان.
3.عام پي سي آر ۾، اها پيداوار جي وڏي مقدار حاصل ڪري سگهي ٿي، ۽ فلوروسينس مقداري پي سي آر ۾، اهو تمام گهٽ ڪنسنٽريشن سان ٽيمپليٽ جي ايمپليفڪيشن وکر ۽ فلوروسينس قدر جي معمول کي بهتر ڪري سگهي ٿو.مناسب هڪ اعلي sensitivity PCR ڳولڻ reagent طور استعمال لاء.
4.۽ Multiplex PCR amplification رد عمل ۾ استعمال ڪري سگهجي ٿو.
5.5′→3′ پوليمريز سرگرمي، 5′→3′ exonuclease سرگرمي؛نمبر 3′→5′ exonuclease سرگرمي؛ڪو به پروف ريڊنگ فنڪشن.
6.PCR ۽ RT-PCR جي معيار ۽ مقدار جي جاچ لاءِ مناسب.
7.PCR پراڊڪٽ جو 3′ پڇاڙي A آهي، جنهن کي سڌو سنئون T ویکٹر ۾ ڪلون ڪري سگهجي ٿو.
8.ٽن مرحلن واري طريقي جي سفارش ڪئي وئي آهي پرائمر لاءِ گهٽ اينيلنگ گرمي پد سان يا 200 بي پي کان وڌيڪ ٽڪڙن کي وڌائڻ لاءِ.
