2×Sensi Direct Premix-UNG (Probe qPCR)
ٻلي نمبر: HCB5151A
SensiDirect Premix-UNG (Probe qPCR) PCR سڌو سنئون نموني مان ڊي اين اي ڪڍڻ يا نموني تيار ڪرڻ کان سواءِ ٺاهيو ويو آهي.هي ريجنٽ گرم شروع ٿيندڙ ڊي اين اي پوليميرس، يوريل ڊي اين اي گلائڪوسيليز (UNG)، RNase Inhibitor، MgCl تي مشتمل آهي.2، dNTPs (dUTP جي بدران dUTP سان)، ۽ اسٽيبلائيزر، مقدار جي PCR لاءِ (qPCR).هي ريجينٽ اعليٰ روڪٿام رواداري کي اڳڀرائي ڪري ٿو، ۽ اهڙيءَ طرح اهو سڌو سنئون نموني جي چڪاس تي لاڳو ٿي سگهي ٿو جهڙوڪ گلا سواب، لعاب، اينٽي ڪوگوليٽ ٿيل سڄو رت، پلازما ۽ سيرم بغير ڊي اين اي ڪڍڻ جي.ريجينٽ qPCR لاءِ ملڪيت واري بفر کي استعمال ڪري ٿو مليل اينزائمز سان مخالف inhibitory DNA پوليميرس ۽ UNG enzyme.تنهن ڪري، اهو حاصل ڪري سگھي ٿو ٽارگيٽ جين جي سٺي واڌ ويجهه واري نموني ۾ جنهن ۾ رڪاوٽون شامل آهن ۽ PCR جي بقايا ۽ ايروسول آلودگي جي ڪري غلط مثبت واڌارو کي روڪيو.هي ريجنٽ اڪثر فلورسنٽ مقداري پي سي آر آلات سان مطابقت رکي ٿو، جهڙوڪ اپلائيڊ بايو سسٽم، ايپينڊورف، بايو-راڊ، روچ وغيره.
اجزاء
1. 50×SensiDirect Enzyme/UNG Mix
2. 2×SensiDirect پريمڪس بفر (dUTP)
اسٽوريج حالتون
سڀني حصن کي رکڻ گهرجي -20 ℃ ڊگھي مدت جي اسٽوريج لاءِ ۽ 4 ℃ تائين 3 مهينن تائين.مھرباني ڪري استعمال ڪرڻ کان پھريان پگھلڻ کان پوءِ چڱيءَ طرح ملايو ۽ سينٽرريفيوج.بار بار منجمد ٿيڻ کان پاسو ڪريو.
سائيڪلنگ پروٽوڪول
| قدم | گرمي پد | وقت | سائيڪل |
| هضم | 50 ℃ | 2 منٽ | 1 |
| Polymerase چالو ڪرڻ | 95 ℃ | 1-5 منٽ | 1 |
| ڏند ڪٿا | 95 ℃ | 10-20s | 40-50 |
| اينيلنگ / توسيع | 56-64 ℃ | 20-60s |
پائپنگ جون هدايتون
| ريجنٽ | حجم في ردعمل | حجم في رد عمل | آخري ڪنسنٽريشن |
| 2 × SensiDirect پريمڪس بفر (dUTP) | 12.5µL | 25µL | 1× |
| 50×SensiDirect Enzyme/UNG Mix | 0.5µL | 1µL | 1× |
| 25×Primer-Probe Mix1، 2 | 1µL | 2µL | 1× |
| نمونو3، 4 | - | - | - |
| ڊي ايڇ2O | - | - | - |
| ڪل مقدار | 25 μL | 50 μL | - |
1. پرائمر جي آخري ڪنسنٽريشن عام طور تي 0.2μM آهي.بهتر نتيجن لاءِ، پرائمر ڪنسنٽريشن کي 0.2-1μM جي حد اندر بهتر ڪري سگهجي ٿو.
2. عام طور تي، تحقيق ڪنسنٽريشن 0.1-0.3μM جي حد اندر بهتر ڪري سگهجي ٿو.جاچ جي بهترين ڪنسنٽريشن جو تعلق حقيقي وقت جي پي سي آر ايمپليفڪيشن اوزار، جاچ جي قسم، ۽ فلورسنٽ ليبلنگ مواد جي قسم سان آهي.مھرباني ڪري اوزار مينوئل يا ھر فلورسنٽ پروب جي مخصوص ضرورتن جو حوالو ڏيو.
3. مختلف قسم جا نمونا مختلف قسمن ۽ مواد تي مشتمل آهن inhibitor ۽ ٽارگيٽ جين جو نقل نمبر.نموني جي مقدار کي اصل حالت تي غور ڪيو وڃي.جيڪڏهن ضروري هجي ته، نيوڪليز-مفت پاڻي يا TE بفر شامل ڪندي نموني کي گھٽايو.
4. مختلف نمونن جي تجويز ڪيل مقدار:
| نمونو | هڪ لاء حجم 50 μL ردعمل | وڌ ۾ وڌ تناسب |
| Anticoagulated سڄو رت | 2.5 μL | 5% |
| پلازما | 15 μL | 30 سيڪڙو |
| سيرم | 10 μL | 20 سيڪڙو |
| گلا ڦاٽڻ | 10 μL | 20 سيڪڙو |
| لعاب | 10 μL | 20 سيڪڙو |
معيار تي ضابطو
1. فنڪشن جو پتو لڳائڻ: حساسيت، مخصوصيت ۽ qPCR جي ورجائي قابليت.
2. ڪا به خارجي نيوڪليز سرگرمي ناهي: نڪي خارجي اينڊونڪليز ۽ خارجي آلودگي.
پيداوار جا نوٽس
1. هي پراڊڪٽ هڪ نئين قسم جو گرم-شروع ڊي اين اي پوليمريز استعمال ڪري ٿو، جيڪو 1-5 منٽن ۾ چالو ٿي سگهي ٿو. ڇاڪاڻ ته ان جي رد عمل جي بفر کي بهتر ڪيو ويو آهي، اهو ڊبل يا هڪ کان وڌيڪ فلوروسينس مقدار جي PCR لاء وڌيڪ موزون آهي پروب طريقو استعمال ڪندي.
2. جيڪڏهن پي سي آر ايمپليفڪيشن جي Rn ويليو تمام گهٽ آهي يا ايمپليفڪيشن کي ظاهري طور تي روڪيو ويو آهي، نموني جي مقدار کي گهٽائڻ، رد عمل جي مقدار کي وڌائڻ يا نموني جي پوئين گهٽتائي نتيجن کي بهتر ڪري سگهي ٿي.
3. رت، لعاب، پيشاب، گلي جي سواب وغيره کي گڏ ڪرڻ کي ڪلينيڪل معيار جي ضرورتن تي عمل ڪرڻ گهرجي، ۽ تازو نمونو استعمال ڪري سگهجي ٿو نيوڪليڪ ايسڊ جي تباهي کي روڪڻ لاءِ.
4. جيئن ته مختلف amplicons ۾ dUTP جي مختلف استعمال جي ڪارڪردگي ۽ UNG ڏانهن حساسيت آهي، ريگينٽس کي بهتر ٿيڻ گهرجي جيڪڏهن UNG سسٽم کي استعمال ڪندي تشخيص جي حساسيت گهٽجي وڃي.مهرباني ڪري اسان سان رابطو ڪريو ٽيڪنيڪل سپورٽ لاءِ جيڪڏهن گهربل هجي.
5. ھڪڙي قدم جي رد عمل جي وچ ۾ کڻڻ واري پي سي آر جي مصنوعات کي وڌائڻ کان بچڻ لاء، وقف تجرباتي علائقو ۽ پائپٽ جي ضرورت آھي amplification لاء.دستانن سان ڪم ڪريو ۽ بار بار تبديل ڪريو ۽ PCR ايمپليفڪيشن کان پوءِ رد عمل واري ٽيوب کي نه کوليو.
