Uracil DNA Glycosylase
Uracil-DNA Glycosylase (UNG يا UDG) 25 kDa جي ماليڪيولر وزن سان گڏ E.coli جو هڪ ٻيهر ٺهندڙ ڪلون آهي.اهو uracil تي مشتمل سنگل اسٽرينڊ ۽ ڊبل اسٽرينڊ ڊي اين اي مان آزاد يوريل جي ڇڏڻ کي متحرڪ ڪري ٿو، ۽ آر اين اي جي خلاف غير فعال آهي، ۽ پي سي آر ايمپليفڪيشن مصنوعات جي آلودگي کي روڪڻ لاءِ استعمال ڪري سگهجي ٿو.عمل جو اصول ان حقيقت تي مبني آهي ته جيڪڏهن dUTP کي PCR رد عمل ۾ dTTP لاءِ متبادل بڻايو وڃي ۽ هڪ PCR ايمپليفڪيشن پراڊڪٽ ٺاهيو وڃي جنهن ۾ dU بيسز شامل آهن، انزائيم چونڊيل طور تي يو بيس جي گلائڪوسيڊڪ بانڊ کي ٽوڙي سگهي ٿو سنگل اسٽرينڊ ۽ ڊبل اسٽرينڊ ۾. ڊي اين اي ۽ پي سي آر ايمپليفڪيشن پراڊڪٽ کي خراب ڪريو.
تجويز ڪيل درخواست
آلودگي جي روڪٿام وڌائڻ
رکڻ جي حالت
-20 ° C ڊگھي مدت جي اسٽوريج لاء، استعمال ڪرڻ کان اڳ چڱي طرح ملايو وڃي، بار بار منجمد ٿيڻ کان بچڻ.
اسٽوريج بفر
20 mM Tris-HCl (pH 8.0)، 150 mM NaCl، 1 mM EDTA، 1 mM DTT، اسٽيبلائزر، 50٪ گليسرول.
يونٽ جي تعريف
37°C تي 1 ڪلاڪ اندر dU بيس تي مشتمل 1µg سنگل اسٽرينڊ ڊي اين اي کي ختم ڪرڻ لاءِ گهربل اينزائم جو مقدار 1 يونٽ آهي.
معيار تي ضابطو
1.SDS-PAGE electrophoretic پاڪائي 98٪ کان وڌيڪ
2.امپلائيشن حساسيت، بيچ کان بيچ ڪنٽرول، استحڪام
3.UNG جي 1U کان پوءِ 2 منٽ لاءِ 50 ℃ تي علاج ڪيو وڃي ٿو، ٽيمپليٽ جنهن ۾ U هيٺيون 103 ڪاپيون هجن مڪمل طور تي خراب ٿيڻ گهرجي ۽ ڪا به واڌارو پيداوار پيدا نه ٿي سگهي.
4.ڪابه خارجي نيوڪليز سرگرمي ناهي
هدايتون
| اجزاء | حجم (μL) | آخري ڪنسنٽريشن |
| 10 × PCR بفر (dNTP مفت، Mg²+واندو) | 5 | 1× |
| dUTPs (dCTP، dGTP، dATP) | - | 200 μM |
| dUTP (dTTP کي تبديل ڪريو) | - | 200-600 μM |
| 25 mM MgCl2 | 2-8 μL | 1-4 ايم ايم |
| 5 U/μL تاق | 0.25 | 1.25 يو |
| 5 U/μL UNG | 0.25 (0.1-0.5) | 0.25 يو (0.1-0.5) |
| 25 × پرائمر ميڪسهڪ | 2 | 1× |
| سانچو | - | 1μg/رد عمل |
| ddH₂O | 50 تائين | - |
نوٽ: الف: جيڪڏهن استعمال ڪيو وڃي qPCR/qRT-PCR لاءِ، فلورسنٽ پروب کي رد عمل واري نظام ۾ شامل ڪيو وڃي.عام طور تي، 0.2 μM جي آخري پرائمر ڪنسنٽريشن سٺا نتيجا ڏئي سگھن ٿا؛جڏهن رد عمل جي ڪارڪردگي خراب آهي، پرائمر ڪنسنٽريشن کي 0.2-1 μM جي حد ۾ ترتيب ڏئي سگهجي ٿو.عام طور تي، جاچ ڪنسنٽريشن 0.1-0.3 μM جي حد ۾ بهتر ڪئي وئي آهي.پرائمر ۽ پروب جو بهترين ميلاپ ڳولڻ لاءِ ڪنسنٽريشن گريڊينٽ تجربا ڪري سگهجن ٿا.
نوٽس
1.UNG enzyme استعمال ڪري سگھجي ٿو آلوده ٿيل dUTP امپليفڪيشن پروڊڪٽس کي رد عمل واري نظام مان هٽائڻ لاءِ PCR ايمپليفڪيشن رد عمل کان اڳ، پوءِ پروڊڪٽ جي آلودگي جي ڪري غلط-مثبت نتيجن کان بچڻ لاءِ.
2.مخالف آلودگي PCR ردعمل ۾ استعمال ٿيڻ لاءِ UNG اينزيم لاءِ بهترين درجه حرارت عام طور تي 50 ℃ 2 منٽ لاءِ آهي؛غير فعال ٿيڻ جي حالت 5 منٽ لاء 95 ℃ آهي.
3.بار بار منجمد ٿيڻ کان پاسو ڪريو، ۽ وڏي درجه حرارت جي ڦيرڦار کي بي نقاب نه ڪريو.
4.مختلف جين کي وڌايو وڃي ٿو DUTP جي مختلف استعمال جي ڪارڪردگي ۽ UNG اينزيم کي حساسيت، تنهن ڪري، جيڪڏهن UNG سسٽم جي استعمال سان تشخيص جي حساسيت ۾ گهٽتائي ٿئي ٿي، ردعمل سسٽم کي ترتيب ڏيڻ ۽ بهتر ڪرڻ گهرجي، جيڪڏهن توهان کي ٽيڪنيڪل سپورٽ جي ضرورت آهي، مهرباني ڪري رابطو ڪريو. اسان جي ڪمپني.
