RT-LAMP فلورنسنٽ ماسٽر ميڪس
ھن پراڊڪٽ ۾ رد عمل بفر، RT-Enzymes Mix (Bst DNA polymerase and heat-resistant reverse transcriptase)، lyophilized Protectants ۽فلورسنٽرنگ جا اجزاء.رد عمل جي بفر ۾ Mg2+، dNTP ۽ ٻيا ضروري جزا شامل آهن.استعمال ڪرڻ لاء، صرف بفر، رد عمل اينزيم، فلوروسنٽ ڊائي، پرائمر کي ملايو ۽ ٽيمپليٽ شامل ڪريو، شامل ڪريو لائوفيلائيز محافظ سڌو سنئون استعمال ڪري سگھن ٿا.اهو هڪ lyophilizer سان ڳنڍيل هو ۽ lyophilized، ۽ صرف پرائمر ۽ ٽيمپليٽ شامل ڪيا ويا جڏهن استعمال ڪيو ويو.هن reagent اعلي amplification ڪارڪردگي ۽ sensitivity ڪئي.
جزو
| جزو | HCB5205A-01 | HCB5205A-02 | HCB5205A-03 |
| لوپ وچولي امپليڪشن بفر | 1.2 ايم ايل | 4 ايم ايل × 3 | 12 ايم ايل × 10 |
| RT-Enzymes مکس | 245 μL | 2.45 ايم ايل | 2.45 ايم ايل × 10 |
| لائوفيلائيز محافظ | 0.96 ايم ايل × 2 | 9.60 ايم ايل × 2 | 9.60 ايم ايل × 20 |
| 25 × رنگ | 192 μL | 0.96 ايم ايل × 2 | 0.96 ايم ايل × 20 |
درخواستون
DNA يا RNA isothermal amplification لاءِ.
اسٽوريج جون حالتون
خشڪ برف سان ٽرانسپورٽ، -25 ~ -15 ℃ تي ذخيرو ٿيل.بار بار منجمد ٿيڻ کان پاسو ڪريو، پيداوار 12 مهينن لاءِ صحيح آهي.
پروٽوڪول
1.ڪمري جي حرارت تي استعمال ٿيڻ واري رد عمل بفر کي ٿڪايو.چڱيءَ طرح ملائڻ لاءِ وورٽيڪس کي مختصر طور تي يا ٽيوب کي ڪيترائي ڀيرا ڦيرايو، پوءِ ٽيوب جي تري تائين مائع گڏ ڪرڻ لاءِ سينٽرفيوج ڪريو.
2.ردعمل سسٽم جي تياري.هي ريجنٽ ٻن ردعمل سسٽم ۾ تيار ٿي سگهي ٿو، مائع ردعمل ميڪس ۽ لائوفيلائيز سسٽم ميڪس.
1) مائع ردعمل ميڪس تيار ڪريو
| جزو | حجم |
| لوپ وچولي امپليڪشن بفر | 12.5 μL |
| 25 × رنگ | 2 μL |
| RT-Enzymes مکس | 2.55 μL |
| 10 × پرائمر ميڪسa | 5 μL |
| ٽيمپليٽ DNA/RNA b | × μL |
| نيوڪليس کان پاڪ پاڻي | 50 μL تائين |
2) Lyophilization سسٽم ميلاپ
① lyophilized mix تيار ڪريو
| جزو | حجم |
| لوپ وچولي امپليڪشن بفر | 12.5 μL |
| لائوفيلائيز محافظ | 20 μL |
| 25 × رنگ | 2 μL |
| RT-Enzymes مکس | 2.55 μL |
| نيوڪليس کان پاڪ پاڻي | 50 μL تائين |
② Lyophilization: تيار ڪيل ميڪس کي 50μL سسٽم ۾ لائوفيلائيز ڪيو ويو
③ تيار ڪريو ردعمل مرکب
| جزو | حجم |
| لائوفيل ٿيل مرکب | 1 ٽڪرو |
| 10 × پرائمر ميڪسa | 5 μL |
| ٽيمپليٽ DNA/RNA b | × μL |
| نيوڪليس کان پاڪ پاڻي | 50 μL تائين |
نوٽس:
1) هڪ.10×پرائمر ميڪس: 16 μM FIP/BIP، 2 μM F3/B3، 4 μM لوپ F/B؛
2) ب.DEPC (پاڻيءَ ۾ حل ٿيندڙ) نيوڪليڪ ايسڊ ٽيمپل لاءِ سفارش ڪئي وئي آهي.
3)Amplification Reaction: هيٺ ڏنل پروگرام سيٽ اپ ڪريو فلورسنٽ پي سي آر اوزار تي (مثال طور ABI7500، وغيره):
| گرمي پد | وقت | حلقو |
| 65 ℃ | 60 سيڪنڊ * FAM فلورسنس گڏ ڪريو | 30 |
نوٽس
1.لوڻ بفر ٽيوب جي تري ۾ ظاهر ٿي سگھي ٿو، ڪمري جي حرارت تي چڱيءَ طرح ملائڻ لاءِ ٽيوب کي مختصر طور تي يا وري ٽيوب کي ڪيترائي ڀيرا ڦيرايو.
2.رد عمل جي گرمي پد 62 ℃ ۽ 68 ℃ جي وچ ۾ پرائمر جي حالت مطابق بهتر ٿي سگهي ٿو.
3.تجربا معياري ٿيڻ گهرجي، بشمول رد عمل سسٽم جي تياري، ليوفيلائيزيشن، ۽ نموني پروسيسنگ ۽ نموني شامل ڪرڻ جي عمل؛
4.آلودگي کان بچڻ لاء، رد عمل سسٽم کي الٽرا صاف بينچ ۾ تيار ڪرڻ جي سفارش ڪئي وئي آهي، ٻي صورت ۾ ڪمري جي فوم هود ۾ ٽيمپليٽس شامل ڪريو غلط مثبت مداخلت کان بچڻ لاء.
