هڪ قدم RT-qPCR SYBR گرين پريمڪس
ٻلي نمبر: HCB5140A
هڪ قدم RT-qPCR سائبر گرين پريمڪس فلوروسينس مقدار جي لاءِ آهي SYBR گرين I رنگ جي بنياد تي.جين-مخصوص پرائمر استعمال ڪندي، ريورس ٽرانسڪرپشن ۽ qPCR رد عمل هڪ ٽيوب ۾ مڪمل ڪيا ويا آهن، بار بار ڪيپ کولڻ ۽ پائپنگ آپريشن جي ضرورت کي ختم ڪرڻ، امتحان جي ڪارڪردگي کي بهتر بنائڻ ۽ آلودگي جي خطري کي گهٽائڻ.آر اين اي نمونن لاءِ، ڪِٽ استعمال ڪري ٿي گرميءَ جي مزاحمتي ريورس ٽرانسڪرپٽيس لاءِ موثر سي ڊي اين اي سنٿيسس ۽ هاٽ اسٽارٽ ٽاڪ ڊي اين اي پوليمريز مقداري واڌ ويجهه لاءِ.بهتر ڪيل بفر سسٽم جي تحت، کٽ جي حساسيت تمام گهڻي اظهار ڪيل هدفن لاءِ 0.1 pg جيتري ٿي سگهي ٿي ۽ اعتدال سان بيان ڪيل هدفن لاءِ 1 pg جيتري ٿي سگهي ٿي.ڪٽ ڊي اين اي نموني جي وڌائڻ ۽ مقدار جي لاء مناسب آهي.اهو مختلف ٻوٽن ۽ جانورن جي نمونن، سيلز ۽ مائڪروجنزمن مان نيوڪليڪ اسيد جي حساس ڳولڻ ۽ مقدار کي درست ڪري ٿو.
اجزاء
| No | نالو | حجم | حجم |
| 1 | ترقي يافته بفر | 250 μL | 2 × 1.25 ايم ايل |
| 2 | ترقي يافته اينزيم ميڪس | 20 μL | 200 μL |
| 3 | RNase Free H2O | 250 μL | 2 × 1.25 ايم ايل |
اسٽوريج جون حالتون
هي پراڊڪٽ 1 سال لاءِ روشنيءَ کان پري -25~-15℃ تي محفوظ ڪيو وڃي.
هدايتون
1. رد عمل سسٽم جي ٺاھ جوڙd
| اجزاء | حجم (μL) | حجم (μL) | آخري ڪنسنٽريشن |
| ترقي يافته بفر | 12.5 | 25 | 1× |
| ترقي يافته اينزيم ميڪس | 1 | 2 | - |
| فارورڊ پرائمر (10 μmol/L)a | 0.5 | 1 | 0.2 μmol/L |
| ريورس پرائمر (10 μmol/L)a | 0.5 | 1 | 0.2 μmol/L |
| آر اين اي ٽيمپليٽb | X | X | - |
| RNase Free H2اوc | 25 تائين | 50 تائين | - |
نوٽس:
1) هڪ.ٽيهن جو آخري پرائمر ڪنسنٽريشن 0.2 μmol/L هو، جنهن کي 0.1 ۽ 1μmol/L جي وچ ۾ به ترتيب ڏئي سگهجي ٿو.
2) ب.ريجينٽ انتهائي حساس آهي، ڪل RNA سان 1pg-1μg جي حد ۾، ۽ انساني نمونن جي جانچ ڏيکاري ٿي هڪ بهترين ان پٽ 1 pg-100 ng، مجموعي طور تي Ct قدر لاءِ ڪنٽرول ڪري 15-30 جي حد ۾ مناسب طور تي.
3) ج.اهو 20μL يا 50μL استعمال ڪرڻ جي صلاح ڏني وئي آهي انهي کي يقيني بڻائڻ لاءِ ته ٽارگيٽ جين امپليڪشن جي صحيحيت ۽ ٻيهر پيداوار.
4) ڊي.مھرباني ڪري الٽرا-صاف بينچ ۾ تيار ڪريو ۽ استعمال ڪريو نيوڪليز ريزيڊيو فري ٽائيپس ۽ ردعمل ٽيوب؛فلٽر ڪارٽريز سان صلاح ڏني وئي آهي.پار آلودگي ۽ ايروسول آلودگي کان بچاء.
2.رد عمل پروگرام
| سائيڪل قدم | عارضي. | وقت | سائيڪلون |
| ريورس ٽرانسپشن | 50 ℃a | 6 منٽ | 1 |
| شروعاتي تباهي | 95 ℃ | 5 منٽ | 1 |
| وڌائڻ وارو ردعمل | 95 ℃ | 15 سيڪنڊ | 40 |
| 60 ℃b | 30 سيڪنڊ | ||
| پگھلڻ واري وکر اسٽيج | اوزار ڊفالٽ | 1 | |
نوٽس:
1) هڪ.ريورس ٽرانسپشن جو گرمي پد 50-55 ° C جي وچ ۾ تجرباتي ضرورتن مطابق چونڊيو وڃي ٿو.ڊي اين اي نموني لاء، ريورس ٽرانسپشن جي عمل کي ختم ڪري سگهجي ٿو.
2) ب.خاص حالتن ۾ annealing / توسيع جي گرمي پد پرائمر Tm قدر جي مطابق ترتيب ڏئي سگهجي ٿو، 60 ° C جي سفارش ڪئي وئي آهي.
نوٽس
1. هي پيداوار صرف تحقيق جي استعمال لاء آهي.
2. مھرباني ڪري پنھنجي حفاظت لاءِ ليب ڪوٽن ۽ ڊسپوزيبل دستانن سان ڪم ڪريو.
