BspQI
BspQI کي E. coli ۾ ٻيهر گڏ ڪري سگهجي ٿو جيڪي مخصوص سائيٽن کي سڃاڻي سگهن ٿا ۽ هيٺ پيدا ڪيا ويا آهن.
BspQI، هڪ IIs پابندي endonuclease پابندي endonuclease، هڪ ريزومبيننٽ E. coli strain مان نڪتل آهي جيڪو ڪلون ٿيل ۽ تبديل ٿيل BspQI جين کي Bacillus sphaericus مان کڻندو آهي.اهو مخصوص سائيٽن کي سڃاڻي سگهي ٿو، ۽ سڃاڻپ جي ترتيب ۽ صفائي واري سائيٽون هن ريت آهن:
5' · · · GCTCTTC(N) · · · · · · · · · · · · · · ·
3' · · · · CGAGAAG(NNNN) · · · · 5'
پيداوار جون خاصيتون
1. اعلي سرگرمي، تيز هضم؛
2. گھٽ اسٽار سرگرمي، صحيح ڪٽڻ کي يقيني بڻائڻ جهڙوڪ "scalpel"؛
3. بغير BSA ۽ جانور-آزاد مفت؛
ميٿيلائيشن حساسيت
Dايم ميٿيليشن:حساس نه؛
Dسي ايم ميٿيليشن:حساس نه؛
سي پي جي ميٿيليشن:حساس نه؛
اسٽوريج حالتون
پيداوار کي موڪليو وڃي ≤ 0 ℃؛اسٽور -25~-15℃ حالت ۾.
اسٽوريج بفر
20mM Tris-HCl، 0.1mM EDTA، 500 mM KCl، 1.0 mM dithiothreitol، 500 µg/ml Recombinant Albumin، 0. 1% Trition X-100 ۽ 50% گليسرول (pH 7.0 @ 25°C).
يونٽ جي تعريف
ون يونٽ کي 1µg اندروني ڪنٽرول ڊي اين اي 1 ڪلاڪ ۾ 50°C تي هضم ڪرڻ لاءِ گهربل اينزائم جي مقدار جي طور تي بيان ڪيو ويو آهي جنهن جي مجموعي رد عمل واري مقدار 50 μL.
معيار تي ضابطو
پروٽين جي صفائي جو جائزو (SDS-PAGE):BspQI جي پاڪائي ≥95٪ SDS-PAGE تجزيي پاران طئي ڪئي وئي.
RNase:BspQI جو 10U 1.6μg MS2 RNA سان 4 ڪلاڪن لاءِ 50℃ تي ڪا به خرابي پيدا نه ڪندو آهي جيئن ايگرز جيل الیکٹروفورسس پاران طئي ٿيل آهي.
غير مخصوص DNase سرگرمي:BspQI جو 10U 1μg λ DNA سان 50℃ تي 16 ڪلاڪن لاءِ، 50℃ جي مقابلي ۾ 1 ڪلاڪ لاءِ، ڪو به وڌيڪ ڊي اين اي حاصل نٿو ڪري جيئن ايگرز جيل الیکٹروفورسس پاران طئي ڪيو ويو آهي.
پابندي ۽ بحالي:10U BspQI سان 1 μg λDNA جي هضم ٿيڻ کان پوءِ، DNA جا ٽڪرا T4 DNA ligase سان 16ºC تي لڪي سگھجن ٿا.۽ اهي ligated ٽڪرا BspQI سان ٻيهر ڪري سگھجن ٿا.
اي ڪولي ڊي اين اي: E. coli 16s rDNA-specific TaqMan qPCR جي چڪاس ڏيکاري ٿي ته E.coli جينوم جي باقيات ≤ 0.1pg/ul.
ميزبان پروٽين جي رهائش:≤ 50 پي پي ايم
بيڪٽيريا Endotoxin: LAL-ٽيسٽ، چيني فارماڪوپيا IV 2020 ايڊيشن جي مطابق، جيل حد ٽيسٽ جو طريقو، عام اصول (1143).بيڪٽيريل اينڊوٽوڪسين جو مواد هجڻ گهرجي ≤10 EU/mg.
رد عمل جو نظام ۽ حالتون
| جزو | حجم |
| BspQ I (10 U/μL) | 1 μL |
| ڊي اين اي | 1 μg |
| 10 x BspQ I بفر | 5 μL |
| dd H2O | 50 μL تائين |
رد عمل جي حالت: 50 ℃, 1 ~ 16 ايڇ.
گرمي غير فعال ٿيڻ: 80 ° C 20 منٽ لاء.
تجويز ڪيل رد عمل سسٽم ۽ حالتون نسبتا سٺي اينزيم هضمي اثر مهيا ڪري سگھن ٿيون، جيڪو صرف حوالي لاء آهي، مهرباني ڪري تفصيل لاء تجرباتي نتيجن کي ڏسو.
پيداوار جي درخواست
پابندي endonuclease هضمي، تيز ڪلوننگ.
نوٽس
1. رد عمل جي مقدار جو اينزيم ≤ 1/10 جو مقدار.
2. اسٽار جي سرگرمي ٿي سگھي ٿي جڏهن گليسرول ڪنسنٽريشن 5 سيڪڙو کان وڌيڪ هجي.
3. Cleavage سرگرمي ٿي سگھي ٿي جڏھن Substrate تجويز ڪيل تناسب کان ھيٺ.
