UDG / UNG اينزيمس
UDG (uracil DNA glycosylase) ssDNA ۽ dsDNA ۾ uracil بنيادي ۽ شوگر-فاسفيٽ جي پٺي جي وچ ۾ N-glycosidic لنڪ جي هائڊروليسس کي متحرڪ ڪري سگھي ٿو.اهو آساني سان ايروسول آلودگي کي ڪنٽرول ڪري سگهي ٿو ۽ عام سالماتي حياتياتي نظام جهڙوڪ PCR، qPCR، RT-qPCR ۽ LAMP لاءِ مناسب آهي.
وضاحتون
| اظهار ميزبان | Recombinant E. coliwith uracil DNA glycosylase gene |
| ماليڪيولر وزن | 24. 8kDa |
| پاڪائي | ≥95% (SDS-PAGE) |
| گرمي جي غير فعال ٿيڻ | 95 ℃، 5 ~ 10 منٽ |
| يونٽ جي تعريف | ون يونٽ (U) انزايمن جي مقدار جي طور تي بيان ڪيو ويو آهي جيڪو 25℃ تي 30 منٽن ۾ l μg dU تي مشتمل dsDNA جي هائڊروليسس کي ڪيٽيلائيز ڪرڻ جي ضرورت آهي. |
ذخيرو
پيداوار کي ٻن سالن تائين -25 ℃ ~ -15 ° C تي ذخيرو ڪيو وڃي.
هدايتون
1.پي سي آر جي رد عمل جي آميزش جي تياري هيٺ ڏنل سسٽم مطابق
| اجزاء | حجم (μL) | آخري ڪنسنٽريشن |
| 10×PCR بفر (Mg²+پلس) | 5 | 1× |
| 25 mmol/LMgCl | 3 | 1.5 mmol/L |
| dUTP (10 mmol/L) | 3 | 0.6 mmol/L |
| dCTP/dGTP/dATP/dTTP(10mmol/Leach) | 1 | 0.2 ملي ايم ايل / ليچ |
| ٽيمپليٽ ڊي اين اي | X | - |
| پرائمر1 (10μmol/L) | 2 | 0.4 μmol/L |
| پرائمر 2 (10μmol/L) | 2 | 0.4 μmol/L |
| طاق ڊي اين اي پوليميرس (5 U/μL) | 0. 5 | 0. 05 U/μL |
| Uracil DNA Glycosylase (UDG/UNG)، 1 U/μL | 1 | 1 U/μL |
| ddH₂O | 50 تائين | - |
نوٽ: تجرباتي گهرجن مطابق، dUTP جي آخري ڪنسنٽريشن کي 0.2-0.6 mmol/L جي وچ ۾ ترتيب ڏئي سگھجي ٿو، ۽ 0.2 mmol/L dTTP چونڊيل طور شامل ڪري سگھجي ٿو.
2.وڌائڻ وارو عمل
| سائيڪل قدم | گرمي پد | وقت | سائيڪلون |
| dU تي مشتمل ٽيمپليٽ جي تباهي | 25 ℃ | 10 منٽ | 1 |
| UDG ايڪٽيويشن، ٽيمپليٽ جي شروعاتي ٺهڻ | 95 ℃ | 5 ~ 10 منٽ | 1 |
| رد ڪرڻ | 95 ℃ | 10 سيڪنڊ |
30-35 |
| اينيلنگ | 60 ℃ | 20 سيڪنڊ | |
| واڌارو | 72 ℃ | 30 سيڪنڊ/kb | |
| آخري واڌ | 72 ℃ | 5 منٽ | 1 |
نوٽ: 25 ° C تي رد عمل جو وقت تجرباتي گهرجن مطابق 5-10 منٽ اندر ترتيب ڏئي سگهجي ٿو.
نوٽس
1.UDG اڪثر PCR ردعمل بفرز ۾ سرگرم آهي.
2.اينزائمز کي استعمال ڪرڻ وقت برف جي باڪس ۾ يا برف جي غسل تي ذخيرو ڪيو وڃي، ۽ استعمال ڪرڻ کان پوء فوري طور تي -20 ° C تي ذخيرو ڪيو وڃي.
3.مهرباني ڪري توهان جي صحت ۽ حفاظت کي يقيني بڻائڻ لاءِ ضروري پي پي اي، جهڙوڪ ليبارٽري ڪوٽ ۽ دستانو پائڻ!
