الٽرا نيوڪليز
الٽرا نيوڪليز هڪ جينياتي طور تي انجنيئرڊ ڊينڊونڪليز آهي جيڪو Serratia marcescens مان نڪتل آهي، جيڪو ڊي اين اي يا آر اين اي کي ختم ڪرڻ جي قابل آهي، يا ته ڊبل يا سنگل اسٽرينڊ، لڪير يا گول حالتن جي هڪ وسيع رينج ۾، مڪمل طور تي نيوڪليڪ ايسڊز کي 5'-مونوفاسفيٽ ڊگھائي-5'-monophosphate-oligonucleba3 oligonse3 سان. .جينياتي انجنيئرنگ ترميمن کان پوء، پيداوار کي خمير، ظاهر ڪيو ويو ۽ صاف ڪيو ويو ايسچريچيا ڪولي (E. coli) ۾، جيڪو سيل سپرنيٽنٽ ۽ سيل ليسيٽ سائنسي تحقيق جي ويسڪوسيٽي کي گھٽائي ٿو، پر پروٽين جي صفائي جي ڪارڪردگي ۽ فعال تحقيق کي پڻ بهتر بڻائي ٿو.اهو پڻ استعمال ڪري سگهجي ٿو جين ٿراپي، وائرس صاف ڪرڻ، ويڪسين جي پيداوار، پروٽين ۽ پوليسڪچرائڊ دواسازي جي صنعت ۾ ميزبان ريزيڊيو نيوڪليڪ ايسڊ هٽائڻ واري ريگينٽ جي طور تي.
پيداوار جون خاصيتون
| CAS نمبر | 9025-65-4 |
| EC نمبر. | |
| ماليڪيولر وزن | 30kDa |
| Isoelectric Point | 6.85 |
| پروٽين جي صفائي | ≥99% (SDS-PAGE & SEC-HPLC) |
| مخصوص سرگرمي | ≥1.1×106U/mg |
| وڌ ۾ وڌ درجه حرارت | 37 ° سي |
| وڌ ۾ وڌ پي ايڇ | 8.0 |
| پروٽين سرگرمي | منفي |
| بائيو بارڊن | ~10CFU/100,000U |
| بقايا ميزبان سيل پروٽين | ≤10ppm |
| ڳري ڌاتو | ≤10ppm |
| بيڪٽيريل Endotoxin | $0.25EU/1000U |
| اسٽوريج بفر | 20mm Tris-HCl، pH 8.0، 2mm MgCl2، 20mm NaCl، 50٪ گليسرول |
اسٽوريج حالتون
≤0°C آمد و رفت ；-25~-15°C اسٽوريج، 2 سالن جي صحيحيت (منجمد ٿيڻ کان پاسو ڪريو).
يونٽ جي تعريف
37 °C تي 30 منٽ اندر 1.0 ذريعي △A260 جي جذبي قدر کي تبديل ڪرڻ لاءِ استعمال ٿيندڙ اينزيم جو مقدار، pH 8.0، 37μg سالمن اسپرم ڊي اين اي جي برابر oligonucleotides ۾ ڪٽڻ سان، هڪ فعال يونٽ (U) طور بيان ڪيو ويو.
معيار تي ضابطو
بقايا ميزبان سيل پروٽين: ايليسا کٽ
•پروٽيز باقي بچيل: 250KU/mL UltraNuclease 60min لاءِ سبسٽرٽ سان رد عمل ڪيو، ڪا به سرگرمي نه ملي.
•بيڪٽيريل Endotoxin: LAL-Test, Pharmacopoeia of the People's Republic of China Volume 4 (2020 Edition) gel limit test method.عام اصول (1143).
•بايو بارڊن: دواسازي آف دي پيپلز ريپبلڪ آف چائنا جلد 4 (2020 ايڊيشن) - جنرل
اسٽريلٽي ٽيسٽ لاءِ ضابطا (1101)، پي آر سي نيشنل معيار، GB 4789.2-2016.
•ڳري ڌاتو:ICP-AES، HJ776-2015.
آپريشن
UltraNuclease سرگرمي خاص طور تي روڪي وئي هئي جڏهن SDS ڪنسنٽريشن 0.1٪ کان مٿي هئي يا EDTA
ڪنسنٽريشن 1 ايم ايم کان مٿي هئي. Surfactant Triton X-100، Tween 20 ۽ Tween 80 جو nuclease تي ڪو به اثر نه پيو.
خاصيتون جڏهن ڪنسنٽريشن 1.5٪ کان گهٽ هئي.
| آپريشن | بهترين آپريشن | صحيح آپريشن |
| گرمي پد | 37 ℃ | 0-45 ℃ |
| pH | 8.0-9.2 | 6.0- 11.0 |
| Mg2+ | 1-2 ايم ايم | 1-15 ايم ايم |
| ڊي ٽي ٽي | 0-100 ايم ايم | > 100 ايم ايم |
| 2-Mercaptoethanol | 0-100 ايم ايم | > 100 ايم ايم |
| Monovalent ڌاتو آئن (Na+، K+ وغيره) | 0-20 ايم ايم | 0-200 ايم ايم |
| PO43- | 0-10 ايم ايم | 0-100 ايم ايم |
استعمال ۽ dosage
• ويڪسين جي پروڊڪٽس مان خارجي نيوڪليڪ ايسڊ کي هٽايو، بقايا نيوڪليڪ ايسڊ زهر جي خطري کي گھٽايو ۽ پيداوار جي حفاظت کي بهتر بڻائي.
• نيوڪليڪ ايسڊ جي ڪري فيڊ مائع جي ويسڪوسيٽي کي گھٽايو، پروسيسنگ جو وقت گھٽايو ۽ پروٽين جي پيداوار وڌايو.
• نيوڪليڪ ايسڊ کي هٽايو جيڪو ڍڪيل ذرو (وائرس، شموليت جسم، وغيره)، جيڪو سازگار آهي
ذرات جي ڇڏڻ ۽ صاف ڪرڻ لاء.
| تجرباتي قسم | پروٽين جي پيداوار | وائرس ، ويڪسين | سيل دوائون |
| سيل نمبر | 1g سيل گلي وزن (10ml بفر سان ٻيهر معطل) | 1L خمير مائع supernatant | 1L ثقافت |
| گھٽ ۾ گھٽ دوز | 250U | 100U | 100U |
| تجويز ڪيل دوز | 2500 يو | 25000 يو | 5000U |
• نيوڪليز علاج ڪالمن ڪروميٽوگرافي، اليڪٽرروفورسس ۽ بلوٽنگ تجزيو لاء نموني جي حل ۽ وصولي کي بهتر ڪري سگهي ٿو.
• جين تھراپي ۾، نيوڪليڪ ايسڊ کي ختم ڪيو ويندو آھي صاف ٿيل ايڊينو سان لاڳاپيل وائرس حاصل ڪرڻ لاء.
