پروٽيناس K NGS (پاؤڊر)
ٻلي نمبر: HC4507A
NGS Protease K هڪ مستحڪم سيرين پروٽيز آهي جنهن ۾ اعليٰ اينزائم سرگرمي ۽ وسيع ذيلي ذخيري جي خصوصيت آهي. هي اينزائم ترجيحي طور تي هائيڊروفوبڪ امينو اسيد، سلفر تي مشتمل امينو اسيد ۽ خوشبودار امينو اسيد جي سي ٽرمينل جي ڀرسان ايسٽر بانڊز ۽ پيپٽائيڊ بانڊز کي ختم ڪري ٿو.تنهن ڪري، اهو اڪثر ڪري استعمال ڪيو ويندو آهي پروٽينن کي گهٽ ڪرڻ لاء مختصر پيپٽائڊس ۾.NGS Protease K ASP سان گڏ هڪ عام سيرين پروٽيز آهي39-هن جي69-سر224ڪيٽيليٽڪ ٽريڊ جيڪو سيرين پروٽيز لاءِ منفرد آهي، ۽ ڪيٽيليٽڪ سينٽر ٽو Ca سان گھريل آهي.2+استحڪام لاء پابند سائيٽون، حالتن جي وسيع رينج جي تحت اعلي اينزيمي سرگرمي کي برقرار رکڻ.
تفصيل
| ظاهر | سفيد کان آف-سفيد بيڪار پائوڊر، لائوفيلائزڊ |
| مخصوص سرگرمي | ≥40U/mg سڪل |
| ڊي نيس | ڪو به نه مليو |
| RNase | ڪو به نه مليو |
| بائيو بارڊن | ≤50CFU/g سڪل |
| نيوڪليڪ اسيد جي باقيات | <5pg/mg سڪل |
ملڪيتون
| ذريعو | Tritirachium البم |
| اي سي نمبر | 3.4.21.64(Tritirachium البم مان ٻيهر ملندڙ) |
| ماليڪيولر وزن | 29kDa (SDS-PAGE) |
| Isoelectric پوائنٽ | 7.81 تصوير 1 |
| وڌ ۾ وڌ پي ايڇ | 7.0-12.0 (سڀ اعليٰ سرگرميون انجام ڏين ٿا) تصوير.2 |
| وڌ ۾ وڌ درجه حرارت | 65℃ تصوير.3 |
| pH استحڪام | pH 4.5-12.5 (25℃,16h) تصوير 4 |
| حرارتي استحڪام | هيٺيون 50℃ (pH 8.0، 30min) تصوير.5 |
| اسٽوريج جي استحڪام | 12 مهينن لاءِ 25℃ تي رکيل تصوير.6 |
| چالو ڪندڙ | SDS، يوريا |
| Inhibitors | Diisopropyl fluorophosphate؛benzylsulfonyl fluoride |
اسٽوريج جون حالتون
لائوفيلائيز پائوڊر کي ذخيرو ڪريو -25~-15 ℃ تي گهڻي وقت تائين روشني کان پري؛تحليل کان پوء، aliquot مناسب مقدار ۾ مختصر-مدت اسٽوريج لاء 2-8 ℃ روشني کان پري يا ڊگهي مدت اسٽوريج -25 ~ -15 ℃ روشني کان پري.
اپاءُ
حفاظتي دستانو ۽ چشما پائڻ وقت استعمال ڪريو يا وزن ڪريو، ۽ استعمال کان پوء چڱي طرح هوادار رکو.هي پراڊڪٽ شايد چمڙي جي الرجڪ رد عمل ۽ سنگين اکين جي جلن جو سبب بڻائين.جيڪڏهن ساهه کنيو وڃي ته اهو ٿي سگهي ٿو الرجي يا دمما جي علامات يا dyspnea.سانس جي جلن جو سبب ٿي سگھي ٿو.
يونٽ جي تعريف
NGS Protease K جي ھڪڙي يونٽ کي معياري تعين جي حالتن جي تحت 1 μmol L-tyrosine ۾ ڪيسين کي ھائيڊولائيز ڪرڻ لاء گھربل اينزيم جي مقدار جي طور تي بيان ڪيو ويو آھي.
Reagents جي تياري
| ريجنٽ | ٺاهيندڙ | فهرست |
| ڪيسين ٽيڪنيڪلگوشت جي کير مان | سگما الڊرچ | سي 7078 |
| NaOH | سينوفرم ڪيميائيReagent Co., Ltd. | 10019762 |
| NaH2PO4· 2 ايڇ2O | سينوفرم ڪيميائيReagent Co., Ltd. | 20040718 |
| Na2HPO4 | سينوفرم ڪيميائيReagent Co., Ltd. | 20040618 |
| Trichloroacetic امل | سينوفرم ڪيميائيReagent Co., Ltd. | 80132618 |
| سوڊيم ايڪٽيٽ | سينوفرم ڪيميائيReagent Co., Ltd. | 10018818 |
| ايڪٽڪ اسيد | سينوفرم ڪيميائيReagent Co., Ltd. | 10000218 |
| ايڇ سي ايل | سينوفرم ڪيميائيReagent Co., Ltd. | 10011018 |
| سوڊيم ڪاربونيٽ | سينوفرم ڪيميائيReagent Co., Ltd. | 10019260 |
| فولين-فينول | سانگون بايوٽيڪ (شنگھائي)Co., Ltd. | A500467-0100 |
| ايل ٽائروسين | سگما | 93829 |
ريجنٽ I:
سبسٽريٽ: 1% ڪيسين بوائن جي کير جي محلول مان: 1 گرام بوائن کير ڪيسين کي 50ml 0.1M سوڊيم فاسفيٽ محلول، pH 8.0 ۾ ٽوڙيو، پاڻيءَ جي غسل ۾ 65-70 °C تي 15 منٽن لاءِ گرم ڪريو، اُڇلايو ۽ گھليو، پاڻيءَ سان ٿڌو، ترتيب ڏنل sodium hydroxide to pH 8.0، ۽ dilute in 100ml.
ريجنٽ II:
TCA محلول: 0.1M trichloroacetic acid، 0.2M sodium acetate ۽ 0.3M acetic acid (وزن 1.64g trichloroacetic acid + 1.64g sodium acetate + 1.724mL acetic acid لڳاتار، 50mL deionized پاڻي شامل ڪريو، pH4lute کي HC40 سان ترتيب ڏيو. 100ml).
ريجنٽ III:
0.4m سوڊيم ڪاربونيٽ جو حل (وزن 4.24 گرام اينهائيڊرس سوڊيم ڪاربونيٽ ۽ 100 ملي ليٽر پاڻيءَ ۾ حل ڪريو)
ريجنٽ IV:
فولين فينول ريجنٽ: ڊيونائيز ٿيل پاڻي سان 5 ڀيرا گھٽايو.
ريجنٽ V:
Enzyme diluent: 0.1 M سوڊيم فاسفٽ حل، pH 8.0.
ريجنٽ VI:
L-tyrosine معياري حل: 0, 0.005, 0.025, 0.05, 0.075, 0.1, 0.25 umol/ml L-tyrosine 0.2M HCl سان ٺھيل.
طريقو
1. UV-Vis spectrophotometer کي چالو ڪريو ۽ فوٽو ميٽرڪ ماپ چونڊيو.
2. موج جي ڊيگهه 660nm مقرر ڪريو.
3. پاڻي جي غسل کي چالو ڪريو، گرمي پد 37 ℃ تي مقرر ڪريو، 3-5 منٽ لاء گرمي پد کي يقيني بڻايو وڃي.
4. 0.5mL سبسٽريٽ کي 2mL سينٽرفيوج ٽيوب ۾ 37℃ واٽر باٿ تي 10 منٽن لاءِ اڳي گرم ڪريو.
5. 10 منٽن لاءِ اڳي گرم ٿيل سينٽريفيوج ٽيوب ۾ 0.5mL ڳريل انزائم جو حل ڪڍو.خالي گروپ طور enzyme diluent مقرر ڪريو.
6. رد عمل کان پوء فوري طور تي 1.0 mL TCA reagent شامل ڪريو.چڱيء طرح ملايو ۽ 30 منٽن لاء پاڻي غسل ۾ incubate.
7. Centrifugate ردعمل حل.
8. ڏنل ترتيب ۾ ڏنل اجزاء شامل ڪريو.
| ريجنٽ | حجم |
| سپرنٽنٽ | 0.5 ايم ايل |
| 0.4M سوڊيم ڪاربونيٽ | 2.5 ايم ايل |
| فولين فينول ريجنٽ | 0.5 ايم ايل |
9. پاڻي جي غسل ۾ 30 منٽ لاء 37 ℃ ۾ incubating کان اڳ چڱي طرح ملايو.
10. او ڊي660OD طور مقرر ڪيو ويو1؛خالي ڪنٽرول گروپ: اينزيم ڊيلوئنٽ استعمال ڪيو ويندو آهي اينزيم حل کي تبديل ڪرڻ لاء OD کي طئي ڪرڻ لاء660OD جي طور تي2، ΔOD=OD1-او ڊي2.
11. L-tyrosine معياري وکر: 0.5mL مختلف ڪنسنٽريشن L-tyrosine حل، 2.5mL 0.4M سوڊيم ڪاربونيٽ، 0.5mL فولين فينول ريجينٽ 5mL سينٽرفيوج ٽيوب ۾، 30 منٽ لاءِ 37 ℃ ۾ انڪيوبيٽ ڪريو، OD لاءِ پتو لڳايو660L-tyrosine جي مختلف ڪنسنٽريشن لاءِ، پوءِ حاصل ڪيو معياري وکر Y=kX+b، جتي Y آھي L-tyrosine ڪنسنٽريشن، X آھي OD600.
حساب ڪتاب
2: رد عمل جي حل جو ڪل مقدار (ايم ايل)
0.5: اينزيم حل جو مقدار (ايم ايل)
0.5: رد عمل مائع حجم ڪروموجنڪ عزم ۾ استعمال ڪيو ويو (ايم ايل)
10: رد عمل جو وقت (منٽ)
Df: Dilution گھڻن
C: اينزيم ڪنسنٽريشن (mg/mL)
انگ اکر
تصوير.1 ڊي اين اي ريزيڊيو
| نمونو | Ave C4 | نيوڪليڪ ايسڊ بحالي (پي جي / ايم جي) | بحالي (%) | ڪل نيوڪليڪ تيزاب ( pg/mg) |
| پي آر ڪي | 24.66 | 2.23 | 83% | 2.687 |
| PRK+STD2 | 18.723 | 126.728 | - | - |
| ايس ٽي ڊي 1 | 12.955 |
- |
- |
- |
| STD2 | 16 | |||
| STD3 | 19.125 | |||
| ايس ٽي ڊي 4 | 23.135 | |||
| ايس ٽي ڊي 5 | 26.625 | |||
| آر اين اي فري H2O | اڻڄاتل | - | - | - |
تصوير. 2 بهترين پي ايڇ
Fig.3 وڌ ۾ وڌ گرمي پد
Fig.4 pH استحڪام
Fig.5 حرارتي استحڪام
Fig.6 25℃ تي اسٽوريج جي استحڪام
