PNGase F
Peptide-N-Glycosidase F(PNGase F) سڀ کان وڌيڪ اثرائتو اينزيميٽڪ طريقو آهي جيڪو گليڪوپروٽينن مان لڳ ڀڳ سڀني اين سان ڳنڍيل oligosaccharides کي ختم ڪرڻ لاءِ.PNGase F ھڪڙو اميڊيس آھي، جيڪو N-linked glycoproteins مان ھاء ميننوز، ھائبرڊ، ۽ پيچيده oligosaccharides جي اندروني گھڻا GlcNAc ۽ asparagine residues جي وچ ۾ ٺھيل آھي.
درخواست
هي اينزيم پروٽين مان ڪاربوهائيڊريٽ جي باقيات کي ختم ڪرڻ لاء مفيد آهي.
تياري ۽ وضاحت
| ظاهر | بي رنگ مائع |
| پروٽين جي صفائي | ≥95% (SDS-PAGE کان) |
| سرگرمي | ≥500,000 U/mL |
| Exoglycosidase | ڪابه سرگرمي نه ملي سگهي (ND) |
| Endoglycosidase F1 | ND |
| Endoglycosidase F2 | ND |
| Endoglycosidase F3 | ND |
| Endoglycosidase H | ND |
| پروٽيز | ND |
ملڪيتون
| اي سي نمبر | 3.5.1.52(مائڪرو آرگنزم مان ٻيهر ملندڙ) |
| ماليڪيولر وزن | 35 kDa (SDS-PAGE) |
| Isoelectric پوائنٽ | 8. 14 |
| وڌ ۾ وڌ پي ايڇ | 7.0-8.0 |
| وڌ ۾ وڌ درجه حرارت | 65 °C |
| Substrate جي خاصيت | GlcNAc ۽ asparagine resdues جي وچ ۾ گلائڪوسيڊڪ بانڊ کي صاف ڪرڻ تصوير.1 |
| سڃاڻپ سائيٽون | N-linked glycans جيستائين α1-3 فوڪوز تي مشتمل هجي تصوير 2 |
| چالو ڪندڙ | ڊي ٽي ٽي |
| روڪڻ وارو | ايس ڊي ايس |
| اسٽوريج جي درجه حرارت | -25 ~ -15 ℃ |
| گرمي جي غير فعال ٿيڻ | هڪ 20µL رد عمل جو مرکب جنهن ۾ 1µL PNGase F 75 °C تي 10 منٽن لاءِ انڪيوبيشن ذريعي غير فعال ٿي ويندو آهي. |
تصوير. 1 PNGase F جي سبسٽريٽ جي خصوصيت
تصوير 2 PNGase F جي سڃاڻپ.
جڏهن اندروني GlcNAc باقي بچيل α1-3 فوڪوز سان ڳنڍيل هوندا آهن، PNGase F گلائڪوپروٽين مان N-linked oligosaccharides کي صاف نٿو ڪري سگهي.ھي تبديلي ٻوٽن ۽ ڪجھ حشرن ۾ گلائڪوپروٽينن ۾ عام آھي.
Cاجزاء
|
| اجزاء | توجهه |
| 1 | PNGase F | 50 µl |
| 2 | 10×Glycoprotein Denaturing Buffer | 1000 µl |
| 3 | 10×GlycoBuffer 2 | 1000 µl |
| 4 | 10٪ NP-40 | 1000 µl |
يونٽ جي تعريف
ون يونٽ (U) کي 10 µg denatured RNase B مان 1 ڪلاڪ ۾ 37°C تي 10 µL جي ڪل رد عمل واري مقدار ۾ ڪاربوهائيڊريٽ جي >95% ڪاربوهائيڊريٽ کي هٽائڻ لاءِ گهربل اينزائم جي مقدار جي وضاحت ڪئي وئي آهي.
رد عمل جون حالتون
1. 1-20 µg گلائڪوپروٽين کي ڊيونائيزڊ پاڻيءَ سان ٽوڙيو، 1 µl 10×Glycoprotein Denaturing Buffer ۽ H2O (جيڪڏهن ضروري هجي) شامل ڪريو ته جيئن 10 µl ڪل رد عمل جو مقدار ٺاهيو وڃي.
2.10 منٽ لاءِ 100 ° C تي رکو، ان کي برف تي ٿڌي.
3.شامل ڪريو 2 µl 10×GlycoBuffer 2, 2 µl 10% NP-40 ۽ ملايو.
4.شامل ڪريو 1-2 μl PNGase F ۽ H2اي (جيڪڏهن ضروري هجي) هڪ 20 μl ڪل رد عمل جي مقدار ٺاهڻ ۽ ملائي.
5.60 منٽ لاء 37 ° C تي ردعمل کي وڌايو.
6.SDS-PAGE تجزيو يا HPLC تجزيو لاءِ.
