DNase I
DNase I (Deoxyribonuclease I) هڪ endodeoxyribonuclease آهي جيڪو هضم ڪري سگهي ٿو اڪيلو يا ٻٽي-اسٽرينڊ ڊي اين اي.اهو 5′-ٽرمينل تي فاسفيٽ گروپن سان monodeoxynucleotides يا سنگل يا ڊبل-Stranded oligodeoxynucleotides پيدا ڪرڻ لاءِ فاسفوڊائيسٽر بانڊن کي سڃاڻي ٿو ۽ ان کي صاف ڪري ٿو ۽ 3′-ٽرمينل تي هائيڊروڪسيل.DNase I جي سرگرمي جو دارومدار Ca2+ تي آهي ۽ ان کي ڊبلينٽ دھاتي آئنز جهڙوڪ Mn2+ ۽ Zn2+ ذريعي چالو ڪري سگهجي ٿو.5mM Ca2+ اينزيم کي هائڊروليسس کان بچائيندو آهي.Mg2+ جي موجودگي ۾، اينزيم بي ترتيب طور تي ڪنهن به سائيٽ کي ڊي اين اي جي ڪنهن به اسٽينڊ تي سڃاڻي ۽ صاف ڪري سگهي ٿو.Mn2+ جي موجودگيءَ ۾، ڊي اين اي جا ٻه حصا هڪ ئي وقت سڃاڻي سگھجن ٿا ۽ لڳ ڀڳ هڪ ئي ماڳ تي ڪليو ڪري سگھجن ٿا ته جيئن 1-2 نيوڪليوٽائڊس ڦاٿل ٿلهي آخر ڊي اين اي جا ٽڪرا يا چپچپا آخر ڊي اين اي جا ٽڪرا بڻجي وڃن.
پيداوار جي ملڪيت
Bovine Pancreas DNase I جو خمير اظهار سسٽم ۾ اظهار ڪيو ويو ۽ صاف ڪيو ويو.
Cاجزاء
| جزو | حجم | |||
| 0.1KU | 1KU | 5KU | 50KU | |
| DNase I، RNase آزاد | 20μL | 200μL | 1 ايم ايل | 10 ملي ليٽر |
| 10×DNase I بفر | 1 ايم ايل | 1 ايم ايل | 5 × 1 ايم ايل | 5 × 10 ايم ايل |
ٽرانسپورٽ ۽ اسٽوريج
1. اسٽوريج استحڪام: - 15℃~-25℃ اسٽوريج لاءِ؛
2. ٽرانسپورٽ جي استحڪام: آئس پيڪ جي تحت ٽرانسپورٽ؛
3. ۾ فراهم ڪيل: 10 ايم ايم ٽريس-ايڇ سي ايل، 2 ايم ايم سي سي ايل2، 50٪ گليسرول، پي ايڇ 7.6 تي 25℃.
يونٽ جي تعريف
ون يونٽ انزائم جي مقدار جي طور تي بيان ڪيو ويو آهي جيڪو مڪمل طور تي 1 µg pBR322 DNA کي 10 منٽن ۾ 37 ° C تي مڪمل طور تي ختم ڪري ڇڏيندو.
معيار تي ضابطو
RNase:DNase I جو 5U 1.6 μg MS2 RNA سان 4 ڪلاڪن لاءِ 37 ℃ تي ڪا به خرابي پيدا نه ڪندو آهي جيئن ايگرز جيل الیکٹروفورسس پاران طئي ڪيو ويو آهي.
بيڪٽيريا Endotoxin:LAL-ٽيسٽ، چيني فارماڪوپيا IV 2020 ايڊيشن جي مطابق، جيل حد ٽيسٽ جو طريقو، عام اصول (1143).بيڪٽيريل اينڊوٽوڪسين جو مواد هجڻ گهرجي ≤10 EU/mg.
استعمال لاء هدايتون
1. هيٺ ڏنل تناسب مطابق RNase-free ٽيوب ۾ رد عمل جو حل تيار ڪريو:
| جزو | حجم |
| آر اين اي | ايڪس μg |
| 10 × DNase I بفر | 1 μL |
| DNase I، RNase-free (5U/μL) | 1 U في μg RNA |
| ڊي ايڇ2O | 10 μL تائين |
15 منٽن لاء 2.37 ℃؛
3. رد عمل کي روڪڻ لاءِ ختم ٿيڻ واري بفر کي شامل ڪريو، ۽ DNase I کي غير فعال ڪرڻ لاءِ 10 منٽن لاءِ 65℃ تي گرمي ڪريو. نموني کي سڌو سنئون ايندڙ ٽرانسپشن جي تجربي لاءِ استعمال ڪري سگھجي ٿو.
نوٽس
1. استعمال ڪريو 1U DNase I في μg RNA جي، يا 1U DNase I استعمال ڪريو RNA جي 1μg کان گھٽ لاءِ.
2.EDTA کي 5 ايم ايم جي آخري ڪنسنٽريشن ۾ شامل ڪيو وڃي ته جيئن آر اين اي کي اينزيم جي غير فعال ٿيڻ دوران خراب ٿيڻ کان بچايو وڃي.
