CHO HCP ELISA Kit
هڪ هڪ قدم immunosorbent ELISA طريقو هن امتحان ۾ استعمال ڪيو ويندو آهي.CHOK1 HCP تي مشتمل نمونا هڪ ئي وقت HRP-ليبل ٿيل بکري اينٽي CHOK1 اينٽي باڊي ۽ اينٽي CHOK1 اينٽي باڊي سان رد عمل ڪن ٿا ELISA پليٽ تي ، آخرڪار سولڊ فيز اينٽي باڊي-HCP-ليبل ٿيل اينٽي باڊي جو هڪ سينڊوچ ڪمپليڪس ٺاهي ٿو.غير پابند اينٽيجن اينٽي باڊي ELISA پليٽ کي ڌوئڻ سان ختم ڪري سگھجي ٿو.ڪافي رد عمل لاءِ کوهه ۾ TMB سبسٽرٽ شامل ڪيو ويو آهي.اسٽاپ حل شامل ڪرڻ کان پوء رنگ جي ترقي کي روڪيو ويو آهي، ۽ 450/650nm تي رد عمل جي حل جي OD يا جذب قيمت کي مائڪروپليٽ ريڊر سان پڙهيو ويندو آهي.OD قدر يا جذب جي قيمت حل ۾ HCP مواد جي متناسب آهي.هن مان، حل ۾ HCP ڪنسنٽريشن معياري وکر جي حساب سان حساب ڪري سگهجي ٿو.
درخواست
هي ڪٽ استعمال ڪيو ويندو آهي مقداري طور تي نمونن ۾ CHOK1 ميزبان سيل پروٽين جي باقيات جي مواد کي ڳولڻ لاء.
Cاجزاء
| S/N | جزو | توجهه | اسٽوريج جون حالتون |
| 1 | CHOK1 HCP معياري | 0.5mg/mL | ≤-20 ℃ |
| 2 | اينٽي CHO HCP-HRP | 0.5mg/mL | ≤-20 ℃، روشني کان بچاء |
| 3 | ٽي ايم بي | NA | 2-8 ℃، روشني کان بچاء |
| 4 | 20 × PBST 0.05% | NA | 2-8 ℃ |
| 5 | روڪيو حل | NA | RT |
| 6 | مائڪرو پليٽ سيلرز | NA | RT |
| 7 | بي ايس اي | NA | 2-8 ℃ |
| 8 | هاء adsorption پري ڪوٽنگ پليٽ | NA | 2-8 ℃ |
سامان گھربل
| استعمال جو سامان / سامان | ٺاھڻ | فهرست |
| مائڪروپليٽ پڙهندڙ | ماليڪيولر ڊوائيسز | اسپيڪٽرا ميڪس M5، M5e، يا برابر |
| Thermomixer | Eppendorf | Eppendorf/5355، يا برابر |
| وورتڪس ميڪر | IKA | MS3 ڊجيٽل، يا برابر |
اسٽوريج ۽ استحڪام
1.ٽرانسپورٽ -25 ~ -15 ° سي.
2.اسٽوريج حالتون جدول 1 ۾ ڏيکاريل آهن؛اجزاء 1-2 ذخيرو ٿيل آهن ≤-20 ° C، 5-6 محفوظ ٿيل آهن RT، 3،4، 7، 8 2-8 ℃ تي ذخيرو ٿيل آهن؛صحيح مدت 12 مهينا آهي.
پيداوار جي ماپ
1.حساسيت: 1ng/mL
2.ڳولڻ جي حد: 3- 100ng/mL
3.درستي: Intra-assay CV≤ 10%، Inter-assay CV≤ 15%
4.HCP ڪوريج: >80٪
5.خاصيت: هي کٽ آفاقي آهي ڇاڪاڻ ته اهو خاص طور تي CHOK1 HCP سان رد عمل ڪري ٿو صاف ڪرڻ جي عمل کان آزاد.
Reagent جي تياري
1.PBST 0.05٪
وٺو 15 ml جو 20×PBST 0.05%، ddH ۾ ملائي2اي، ۽ 300 ml تائين ٺهيل.
2.1.0٪ BSA
بوتل مان 1 گرام BSA وٺو ۽ 100 ml PBST 0.05% ۾ ملايو، چڱيءَ طرح ملايو جيستائين مڪمل طور حل نه ٿئي، ۽ 2-8 ° C تي ذخيرو ڪريو.تيار ٿيل ڊيليشن بفر 7 ڏينهن لاءِ صحيح آهي.اهو ضروري آهي ته تيار ڪرڻ جي صلاح ڏني آهي.
3.ڳولڻ جو حل 2μg/mL
0.5 mg/mL Anti-CHO HCP-HRP جو 48μL وٺو ۽ 1% BSA جي 11,952μL ۾ گھٽائي 2μg/mL ڳولڻ واري حل جي آخري ڪنسنٽريشن حاصل ڪريو.
4.QC ۽ CHOK1 HCP معيار جي تياري
| ٽيوب نه. | اصل | توجهه | حجم | 1٪ BSA | مجموعي مقدار | فائنل |
| A | معياري | 0.5mg/mL | 10 | 490 | 500 | 10,000 |
| B | A | 10,000 | 50 | 450 | 500 | 1,000 |
| S1 | B | 1.000 | 50 | 450 | 500 | 100 |
| S2 | S1 | 100 | 300 | 100 | 400 | 75 |
| S3 | S2 | 75 | 200 | 175 | 375 | 40 |
| S4 | S3 | 40 | 150 | 350 | 500 | 12 |
| S5 | S4 | 12 | 200 | 200 | 400 | 6 |
| S6 | S5 | 6 | 200 | 200 | 400 | 3 |
| NC | NA | NA | NA | 200 | 200 | 0 |
| QC | S1 | 100 | 50 | 200 | 250 | 20 |
ٽيبل: QC ۽ معيار جي تياري
امتحاني عمل
1.ريجينٽ تيار ڪريو جيئن مٿي ڏنل ”ريجينٽ تياري“ ۾ ڏيکاريل آهي.
2.هر کوهه ۾ 50μL معيار، نمونا ۽ QCs وٺو (ٽيبل 3 جو حوالو ڏيو)، پوءِ 100μL ڊيٽيڪشن حل (2μg/mL) شامل ڪريو؛پليٽ کي سيلر سان ڍڪيو، ۽ ELISA پليٽ کي Thermomixer تي رکو.2 ڪلاڪ لاءِ 500rpm، 25±3℃ تي انڪيوبيٽ ڪريو.
3.سنڪ ۾ مائڪرو پليٽ کي ڦيرايو ۽ ڪوٽنگ حل کي رد ڪريو.ELISA پليٽ کي ڌوئڻ لاءِ PBST 0.05% جو 300μL هر کوهه ۾ وجهي ڇڏيو ۽ حل کي رد ڪريو، ۽ ڌوئڻ کي 3 ڀيرا ورجايو.پليٽ کي صاف پيپر ٽوال تي ڦيرايو ۽ سڪي ڇڏيو.
4.هر کوهه ۾ 100μL جو TMB سبسٽريٽ شامل ڪريو (ٽيبل 1 ڏسو)، ELISA پليٽ کي سيل ڪريو، ۽ اونداھين ۾ 25 ± 3 ℃ تي 15 منٽ لاءِ سيپ ڪريو.
5.پائپٽ 100μL اسٽاپ حل جو هر کوهه ۾.
6.مائڪروپليٽ ريڊر سان 450/650nm جي موج جي ڊيگهه تي جذب کي ماپ ڪريو.
7.SoftMax يا برابر سافٽ ويئر ذريعي ڊيٽا جو تجزيو.چار-پيراميٽر لوجسٽڪ ريگريشن ماڊل استعمال ڪندي پلاٽ معياري وکر.
معياري وکر مثال
نوٽ: جيڪڏهن نموني ۾ HCP جو ڪنسنٽريشن معياري وکر جي مٿئين حد کان وڌي وڃي، ته ان کي جانچڻ کان اڳ ڊيليوشن بفر سان چڱيءَ طرح ملايو وڃي.
نوٽس
اسٽاپ حل 2M سلفورڪ ايسڊ آهي، مهرباني ڪري ٿڌڻ کان بچڻ لاء احتياط سان سنڀاليو!
