Bst 2.0 DNA Polymerase (گليسرول مفت)
Bst DNA polymerase V2 Bacillus stearothermophilus DNA Polymerase I مان نڪتل آهي، جنهن ۾ 5′→ 3′ DNA پوليمريز سرگرمي ۽ مضبوط زنجير متبادل سرگرمي آهي، پر 5′→3′ exonuclease سرگرمي ناهي.Bst DNA Polymerase V2 strand-displacement، isothermal amplification LAMP (Loop mediated isothermal amplification) ۽ تيز رفتار ترتيب ڏيڻ لاءِ مثالي طور تي موزون آھي.
اجزاء
| جزو | HC5005A-01 | HC5005A-02 | HC5005A-03 |
| BstDNApolymerase V2 (Glycerol-free) (8U/μL) | 0.2 ايم ايل | 1 ايم ايل | 10 ملي |
| 10×HC Bst V2 بفر | 1.5 ايم ايل | 2 × 1.5 ايم ايل | 3 × 10 ايم ايل |
| MgSO4(100 ايم ايم) | 1.5 ايم ايل | 2 × 1.5 ايم ايل | 2 × 10 ايم ايل |
درخواستون
1.LAMP isothermal amplification
2.DNA اسٽرينڊ اڪيلو بي گھرڻ جو رد عمل
3.High GC جين جي ترتيب
4. نانوگرام جي سطح جي ڊي اين اي ترتيب.
رکڻ جي حالت
0 ° C کان هيٺ ٽرانسپورٽ ۽ محفوظ ڪيو وڃي -25 ° C ~ -15 ° C.
يونٽ جي تعريف
ون يونٽ انزائم جي مقدار طور بيان ڪيو ويو آهي جيڪو 25 nmol dNTP کي تيزاب ۾ حل نه ٿيندڙ مواد ۾ 30 منٽن ۾ 65 ° C تي شامل ڪري ٿو.
معيار تي ضابطو
1.پروٽين جي صفائي جو جائزو (SDS-PAGE):Bst DNA پوليمريز V2 جي پاڪائي ≥99٪ مقرر ڪئي وئي آهي SDS-PAGE تجزيي ذريعي Coomassie Blue detection.
2.Exonuclease سرگرمي:هڪ 50 μL رد عمل جو انڪيوبيشن جنهن ۾ گهٽ ۾ گهٽ 8 U جو Bst DNA پوليمريز V2 شامل آهي 1 μg λ -Hind Ⅲ DNA کي 16 ڪلاڪن لاءِ 37 ℃ تي هضم ڪرڻ جو نتيجو ڪو به پتو نه ٿو پوي جيئن طئي ڪيو ويو آهي.
3.نڪاس سرگرمي:هڪ 50 μL رد عمل جو انڪيوبيشن جنهن ۾ گهٽ ۾ گهٽ 8 U جو Bst DNA پوليمريز V2 1 μg pBR322 DNA سان 16 ڪلاڪن لاءِ 37°C تي 37 ڊگري سينٽي گريڊ جي نتيجي ۾ ڪنهن به قسم جي تباهيءَ جو پتو نه پوي.
4.RNase سرگرمي:1.6 μg MS2 RNA سان 1.6 μg MS2 RNA جي گھٽ ۾ گھٽ 8 U جي Bst DNA پوليمريز V2 تي مشتمل 50 μL رد عمل جو 16 ڪلاڪ 37 ° C تي نتيجو ڪو به پتو لڳائڻ وارو تباهي نه ٿيندو جيئن طئي ڪيو ويو آهي.
5.E. coli DNA:Bst DNA پوليمريز V2 جو 120 U E. coli 16S rRNA لوڪس لاءِ مخصوص پرائمر سان TaqMan qPCR استعمال ڪندي E. coli جينومڪ DNA جي موجودگي لاءِ اسڪريننگ ڪئي وئي آهي.E. coli جينومڪ ڊي اين اي آلودگي ≤1 ڪاپي آهي.
LAMP ردعمل
| اجزاء | 25μL |
| 10×HC Bst V2 بفر | 2.5 μL |
| MgSO4 (100 ايم ايم) | 1.5 μL |
| dNTPs (10mm هر هڪ) | 3.5 μL |
| SYTO™ 16 سائو (25×)a | 1.0 μL |
| پرائمر جو مرکبb | 6 μL |
| Bst DNA Polymerase V2 (Glycerol-free) (8 U/uL) | 1 μL |
| سانچو | × μL |
| ddH₂O | 25 μL تائين |
نوٽس:
1) هڪ.SYTOTM 16 گرين (25×): تجرباتي ضرورتن مطابق، ٻيا رنگ متبادل طور استعمال ڪري سگھجن ٿا؛
2) ب.پرائمر ميڪس: 20 µ M FIP، 20 µ M BIP، 2.5 µ M F3، 2.5 µ M B3، 5 µ M LF، 5 µ M LB ۽ ٻيا حجم ملائي حاصل ڪيا ويا.
رد عمل ۽ حالت
1 × HC Bst V2 بفر، انڪيوبيشن جو گرمي پد 60 ° C ۽ 65 ° C جي وچ ۾ آهي.
گرمي جي غير فعال ٿيڻ
80 ° C، 20 منٽ
