5×Neoscript فاسٽ RT-qPCR پريمڪس پلس-UNG
ٻلي نمبر: HCB5142A
Neoscript Fast RT Premix-UNG (Probe qRT-PCR) هڪ انتهائي مستحڪم ون ٽيوب پروب بيسڊ ميڪس آهي جيڪو ون اسٽيپ ريورس ٽرانسڪرپشن ۽ مقداري PCR (qRT-PCR) لاءِ موزون آهي.اهو پرائمر ۽ پروب جي اڳ-مڪسنگ کي سپورٽ ڪري ٿو ۽ گهٽ درجه حرارت تي ڊگهي وقت اسٽوريج کان پوءِ مستحڪم رهي ٿو.آزمائشي ٿيڻ جو نمونو سڌو شامل ڪري سگھجي ٿو جڏهن استعمال ڪندي، بغير اضافي ٽيوب کولڻ / پائپنگ آپريشن.هي پراڊڪٽ اجزاء مهيا ڪري ٿو، مثال طور، گرم شروع ٿيندڙ ڊي اين اي پوليمريس، ايم-ايم ايل وي، گرمي-ليبل uracil DNA گلائڪوسائلس (TS-UNG)، RNase Inhibitor، MgCl2، dNTPs (dUTP سان dTTP جي بدران)، ۽ اسٽيبلائيزر.جينياتي طور تي تبديل ٿيل تيز رفتار ايمپليفڪيشن ريورس ٽرانسڪرپٽ ۽ ڊي اين اي پوليمريز سان، اهو ممڪن آهي ته 20-40 منٽن اندر پي سي آر ايمپليفڪيشن مڪمل ڪيو وڃي.هي ريجينٽ qPCR لاءِ خاص بفر استعمال ڪري ٿو ملاوٽ اينزائمز سان اينٽي انبيٽري امپليفڪيشن اينزائم ۽ يو اين جي اينزائم.تنهن ڪري، اهو ٽارگيٽ جين جي سٺي واڌارو حاصل ڪري سگهي ٿو ۽ پي سي آر جي رهائشي ۽ ايروسول آلودگي جي ڪري غلط واڌ کي روڪي سگھي ٿو.هي ريجنٽ ٺاهيندڙن جي اڪثر فلورسنس مقداري پي سي آر آلات سان مطابقت رکي ٿو جهڙوڪ اپلائيڊ بايو سسٽم، ايپينڊرف، بايو-ريڊ ۽ روچ.
جزو
1.25×Neoscript فاسٽ RTase/UNG ميڪس
2.5×Neoscript فاسٽ RT پريمڪس بفر (dUTP)
اسٽوريج جون حالتون
سڀني حصن کي رکڻ گهرجي -20 ℃ ڊگھي مدت جي اسٽوريج لاءِ ۽ 4 ℃ تائين 3 مهينن تائين.مھرباني ڪري استعمال ڪرڻ کان پھريان پگھلڻ کان پوءِ چڱيءَ طرح ملايو ۽ سينٽرريفيوج.بار بار منجمد ٿيڻ کان پاسو ڪريو.
qRT-PCR رد عمل سسٽم جي تياري
| اجزاء | 25μLسسٽم | 50μLسسٽم | آخري ڪنسنٽريشن |
| 5×Neoscript فاسٽ RT پريمڪس بفر (dUTP) | 5μL | 10μL | 1× |
| 25×Neoscript فاسٽ RTase/UNG ميڪس | 1μL | 2μL | 1× |
| 25×Primer-Probe Mixa | 1μL | 2μL | 1× |
| سانچو RNAb | - | - | - |
| ڊي ايڇ2O | 25μL تائين | 50μL تائين | - |
1) a. پرائمر جي آخري ڪنسنٽريشن عام طور تي 0.2μM هوندي آهي.بهتر نتيجن لاءِ، پرائمر ڪنسنٽريشن کي 0.2-1μM جي حد اندر بهتر ڪري سگهجي ٿو.عام طور تي، تحقيق ڪنسنٽريشن 0.1-0.3μM جي حد اندر بهتر ڪري سگهجي ٿو.
2) b. جڏهن هڪ تيز پي سي آر پروسيسر استعمال ڪيو وڃي، پرائمر ۽ پروبس جي ڪنسنٽريشن کي وڌائڻ جي نتيجي ۾ بهتر ايمپليفڪيشن نتيجا اچي سگهن ٿا، ۽ انهن جي تناسب مطابق بهتر ٿيڻ گهرجي.
3) مختلف قسم جا نمونا مختلف قسم جا مواد ۽ رڪاوٽ جي مواد تي مشتمل آهن ۽ ٽارگيٽ جين جو نقل نمبر.نموني جي مقدار کي اصل حالت تي غور ڪيو وڃي.جيڪڏهن ضروري هجي ته، نموني کي نيوڪليز آزاد پاڻي يا TE بفر سان ٺهرايو.
رد عمل سيشرطون
| باقاعده پي سي آر جو طريقو | فاسٽ پي سي آر جو طريقو | ||||||
| طريقو | عارضي. | وقت | سائيڪل | طريقو | عارضي. | وقت | سائيڪل |
| ريورس ٽرانسپشن | 50 ℃ | 10-20 منٽ | 1 | ريورس ٽرانسپشن | 50 ℃ | 5 منٽ | 1 |
| پوليمريز چالو ڪرڻ | 95 ℃ | 1-5 منٽ | 1 | پوليمريز چالو ڪرڻ | 95 ℃ | 30s | 1 |
| رد ڪرڻ | 95 ℃ | 10-20s | 40-50 | رد ڪرڻ | 95 ℃ | 1-3 سي | 40-50 |
| اينيلنگ ۽ واڌارو | 56-64 ℃ | 20-60s | اينيلنگ ۽ واڌارو | 56-64 ℃ | 3-20s | ||
معيار تي ضابطو
1.فنڪشن جو پتو لڳائڻ: حساسيت، مخصوصيت ۽ qPCR جي ورجائي.
2.ڪابه خارجي نيوڪليز سرگرمي ناهي: نڪي خارجي انڊونيڪليز ۽ ايڪسونڪليز آلودگي.
نوٽس
1.تيز ڊي اين اي پوليمريز جي واڌ جي شرح 1kb/10s کان گهٽ ناهي.مختلف پي سي آر آلات ۾ مختلف حرارتي ۽ کولنگ اسپيڊ، گرمي پد جي ڪنٽرول جا طريقا ۽ حرارتي چالکائي، ۽ اھڙيءَ طرح توھان جي پرائمر/پروب ڪنسنٽريشن جي اصلاح ۽ ھلائڻ جو طريقو توھان جي مخصوص تيز پي سي آر اوزار سان گڏ ضروري آھي.
2.هي پراڊڪٽ وسيع قابل اطلاق انجام ڏئي ٿو، ۽ اهو اعلي حساسيت ماليڪيولر تشخيص لاء مناسب آهي.ٽن قدمن واري PCR طريقي جي سفارش ڪئي وئي آهي پرائمر لاءِ گهٽ اينيلنگ گرمي پد سان يا 200 bp کان وڌيڪ ڊگھي ٽڪرن کي وڌائڻ لاءِ.
3.جيئن ته مختلف amplicons ۾ dUTP جي مختلف استعمال جي ڪارڪردگي ۽ UNG ڏانهن مختلف حساسيت آهي، ريگينٽس کي بهتر ڪيو وڃي ته جيڪڏهن UNG سسٽم کي استعمال ڪندي ڳولڻ جي حساسيت گهٽجي وڃي.مهرباني ڪري اسان سان رابطو ڪريو ٽيڪنيڪل سپورٽ لاءِ جيڪڏهن گهربل هجي.
4.کڻڻ کان بچڻ لاءِ پي سي آر پروڊڪٽس، وقف ٿيل تجرباتي علائقو ۽ پائپٽ کي وڌائڻ جي ضرورت آهي.دستانو سان ڪم ڪريو ۽ بار بار تبديل ڪريو ۽ پي سي آر ٽيوب کي وڌائڻ کان پوء نه کوليو.
