گرم شروعات Bst 2.0 DNA پوليميرس (گليسرول مفت)
Bst DNA polymerase V2 Bacillus stearothermophilus DNA Polymerase I مان نڪتل آهي، جنهن ۾ 5′→ 3′ DNA پوليمريز سرگرمي ۽ مضبوط زنجير متبادل سرگرمي آهي، پر 5′→3′ exonuclease سرگرمي ناهي.Bst DNA Polymerase V2 strand-displacement، isothermal amplification LAMP (Loop mediated isothermal amplification) ۽ تيز رفتار ترتيب ڏيڻ لاءِ مثالي طور تي موزون آھي.Bst DNA polymerase V2 هڪ گرم-شروع نسخو آهي Bst DNA پوليمريز V2 (HC5005A) تي ٻڌل آهي ريورسيبل ترميمي ٽيڪنالاجي، جيڪا ڪمري جي حرارت تي ڊي اين اي پوليمريز جي سرگرمي کي روڪي سگهي ٿي، تنهنڪري رد عمل سسٽم کي هلائي سگهجي ٿو ۽ ڪمري جي حرارت تي ٺاهي سگهجي ٿو. -specific amplification ۽ رد عمل جي ڪارڪردگي کي بهتر، ۽ هي نسخو lyophilized ڪري سگهجي ٿو.ان کان سواء، ان جي سرگرمي تيز گرمي پد تي جاري ڪئي وئي آهي، تنهنڪري هڪ الڳ چالو قدم جي ضرورت ناهي.
اجزاء
| جزو | ايڇ سي 5006A-01 | ايڇ سي 5006A-02 | ايڇ سي 5006A-03 |
Bst DNA پوليميرس V2 (گليسرول فري) (8U/μL) | 0.2 ايم ايل | 1 ايم ايل | 10 ملي |
| 10×HC Bst V2 بفر | 1.5 ايم ايل | 2 × 1.5 ايم ايل | 3 × 10 ايم ايل |
| MgSO4(100 ايم ايم) | 1.5 ايم ايل | 2 × 1.5 ايم ايل | 2 × 10 ايم ايل |
درخواستون
1.LAMP isothermal amplification
2.ڊي اين اي اسٽرينڊ اڪيلو بي گھرڻ جو رد عمل
3.هاء GC جين جي ترتيب
4.نانوگرام جي سطح جي ڊي اين جي ترتيب.
رکڻ جي حالت
0 ° C کان هيٺ ٽرانسپورٽ ۽ محفوظ ڪيو وڃي -25 ° C ~ -15 ° C.
يونٽ جي تعريف
ون يونٽ انزائم جي مقدار طور بيان ڪيو ويو آهي جيڪو 25 nmol dNTP کي تيزاب ۾ حل نه ٿيندڙ مواد ۾ 30 منٽن ۾ 65 ° C تي شامل ڪري ٿو.
معيار تي ضابطو
1.پروٽين جي صفائي جو جائزو (SDS-PAGE):Bst DNA پوليمريز V2 جي پاڪائي ≥99٪ مقرر ڪئي وئي آهي SDS-PAGE تجزيي ذريعي Coomassie Blue detection.
2.Endonucleaseسرگرمي:هڪ 50 μL رد عمل جو انڪيوبيشن جنهن ۾ گهٽ ۾ گهٽ 8 U جو Bst DNA پوليمريز V2 1 μg λDNA سان 16 ڪلاڪن لاءِ 37 ℃ تي نتيجو اهو طئي ڪيو ويو آهي ته ڪنهن به خرابي جو پتو نه پوي.
3.Exonuclease سرگرمي:هڪ 50 μL رد عمل جو انڪيوبيشن جنهن ۾ گهٽ ۾ گهٽ 8 U جو Bst DNA پوليمريز V2 شامل آهي 1 μg λ -Hind Ⅲ DNA کي 16 ڪلاڪن لاءِ 37 ℃ تي هضم ڪرڻ جو نتيجو ڪو به پتو نه ٿو پوي جيئن طئي ڪيو ويو آهي.
4.نڪاس سرگرمي:هڪ 50 μL رد عمل جو انڪيوبيشن جنهن ۾ گهٽ ۾ گهٽ 8 U جو Bst DNA پوليمريز V2 1 μg pBR322 DNA سان 16 ڪلاڪن لاءِ 37°C تي 37 ڊگري سينٽي گريڊ جي نتيجي ۾ ڪنهن به قسم جي تباهيءَ جو پتو نه پوي.
5.RNase سرگرمي:1.6 μg MS2 RNA سان 1.6 μg MS2 RNA جي گھٽ ۾ گھٽ 8 U جي Bst DNA پوليمريز V2 تي مشتمل 50 μL رد عمل جو 16 ڪلاڪ 37 ° C تي نتيجو ڪو به پتو لڳائڻ وارو تباهي نه ٿيندو جيئن طئي ڪيو ويو آهي.
6.اي ڪوليڊي اين اي:Bst DNA پوليمريز V2 جو 120 U E. coli 16S rRNA لوڪس لاءِ مخصوص پرائمر سان TaqMan qPCR استعمال ڪندي E. coli جينومڪ DNA جي موجودگي لاءِ اسڪريننگ ڪئي وئي آهي.E. coli جينومڪ ڊي اين اي آلودگي ≤1 ڪاپي آهي.
LAMP ردعمل
| اجزاء | 25μL |
| 10×HC Bst V2 بفر | 2.5 μL |
| MgSO4 (100 ايم ايم) | 1.5 μL |
| dNTPs (10mm هر هڪ) | 3.5 μL |
| SYTO™ 16 سائو (25×)a | 1.0 μL |
| پرائمر جو مرکبb | 6 μL |
| Bst DNA Polymerase V2 (Glycerol-free) (8 U/uL) | 1 μL |
| سانچو | × μL |
| ddH₂O | 25 μL تائين |
نوٽس:
1) هڪ.SYTOTM 16 گرين (25×): تجرباتي ضرورتن مطابق، ٻيا رنگ متبادل طور استعمال ڪري سگھجن ٿا؛
2) ب.پرائمر ميڪس: 20 µ M FIP، 20 µ M BIP، 2.5 µ M F3، 2.5 µ M B3، 5 µ M LF، 5 µ M LB ۽ ٻيا حجم ملائي حاصل ڪيا ويا.
رد عمل ۽ حالت
1 × HC Bst V2 بفر، انڪيوبيشن جو گرمي پد 60 ° C ۽ 65 ° C جي وچ ۾ آهي.
گرمي جي غير فعال ٿيڻ
80 ° C، 20 منٽ
