ماؤس جينوٽائپنگ کٽ

ٻلي نمبر: HCR2021A

هي پراڊڪٽ هڪ ڪٽ آهي جيڪا ماؤس جينوٽائپس جي تيزيءَ سان سڃاڻپ لاءِ ٺاهي وئي آهي، جنهن ۾ ڊي اين اي کروڊ ڪڍڻ ۽ پي سي آر ايمپليفڪيشن سسٽم شامل آهن.پراڊڪٽ کي پي سي آر امپليفڪيشن لاءِ استعمال ڪري سگهجي ٿو سڌو مائوس جي دم، ڪن، پيرن ۽ ٻين بافتن کان پوءِ سادي صفائي کان پوءِ ليسس بفر ۽ پروٽينين ڪي.ڪو به رات جو هضم، فينول-ڪلوروفارم ڪڍڻ يا ڪالمن صاف ڪرڻ، جيڪو سادو آهي ۽ تجربن جي وقت کي گھٽائي ٿو.پراڊڪٽ 2kb تائين ٽارگيٽ ٽڪڙن کي وڌائڻ لاءِ موزون آهي ۽ 3 جوڑوں جي پرائمر سان ملٽي پلڪس پي سي آر ردعمل.2 × ماؤس ٽشو سڌو پي سي آر ميڪس جينياتي طور تي انجنيئر ٿيل ڊي اين اي پوليميرس، Mg²⁺, dNTPs ۽ هڪ بهتر بفر سسٽم کي اعلي ايمپليفڪيشن ڪارڪردگي ۽ روڪٿام رواداري مهيا ڪرڻ لاء، ته جيئن پي سي آر رد عمل ٽيمپليٽ ۽ پرائمر کي شامل ڪندي ۽ پيداوار کي 1× تائين ريهائيڊريٽ ڪري سگهجي ٿو.هن پراڊڪٽ سان گڏ پي سي آر پراڊڪٽ کي وڌايو ويو آهي 3′ آخر ۾ هڪ نمايان “A” بيس آهي ۽ صاف ڪرڻ کان پوءِ سڌو TA ڪلوننگ لاءِ استعمال ٿي سگهي ٿو.

اجزاء

اسٽوريج جون حالتون

مصنوعات کي 2 سالن تائين -25 ~ -15 ℃ تي ذخيرو ڪيو وڃي.پگھلڻ کان پوءِ، ليسس بفر کي 2 ~ 8 ℃ تي ذخيرو ڪري سگھجي ٿو مختصر مدت جي گھڻن استعمال لاءِ، ۽ استعمال ڪرڻ وقت چڱيءَ طرح ملائي سگھجي ٿو.

درخواست

هي پراڊڪٽ ماؤس جي ناڪ آئوٽ تجزيي، ٽرانسجنڪ ڳولڻ، جينوٽائپنگ وغيره لاءِ موزون آهي.

خاصيتون

1.سادي آپريشن: جينومڪ ڊي اين اي ڪڍڻ جي ڪا ضرورت ناهي؛

2.وائڊ ايپليڪيشن: مختلف ماؤس ٽشوز جي سڌي طرح وڌائڻ لاءِ مناسب.

هدايتون

1.جينوميڪ ڊي اين جي ڇڏڻ

1) lysate جي تياري

ٽشو ليسٽ کي مائوس جي نمونن جي تعداد جي مطابق تيار ڪيو وڃي ٿو جيڪو lysed ڪيو وڃي ٿو (ٽيشو lysate کي سائيٽ تي تيار ڪيل مقدار جي مطابق تيار ڪيو وڃي ۽ استعمال لاءِ چڱيءَ طرح ملايو وڃي) ۽ هڪ نموني لاءِ گهربل ريجنٽس جو تناسب هن ريت آهي:

2) نموني تيار ڪرڻ ۽ ليسس

سفارش ٿيل ٽشو استعمال

صاف سينٽريفيوج ٽيوب ۾ ماؤس ٽشو جا نمونا مناسب مقدار ۾ وٺو، هر سينٽريفيوج ٽيوب ۾ 200μL تازا ٽشو ليسٽ شامل ڪريو، وورٽيڪس ۽ شيڪ ڪريو، پوءِ 30 منٽن لاءِ 55 ℃ تي انڪيوبيٽ ڪريو، ۽ پوءِ 3 منٽ لاءِ 98 ℃ تي گرم ڪريو.

3) سينٽرفيوگريشن

12000 rpm تي 5 منٽ لاءِ ليسيٽ کي چڱيءَ طرح ڇڪيو ۽ سينٽرفيوج ڪريو.supernatant PCR amplification لاء ٽيمپليٽ طور استعمال ڪري سگهجي ٿو.جيڪڏهن ٽيمپليٽ کي اسٽوريج لاءِ گهربل هجي، سپرنيٽنٽ کي ٻي جراثيم کان پاڪ سينٽرفيوج ٽيوب ۾ منتقل ڪريو ۽ 2 هفتن لاءِ -20 ℃ تي ذخيرو ڪريو.

2.پي سي آر واڌارو

2×مائوس ٽشو ڊائريڪٽ پي سي آر مڪس کي -20℃ تان هٽايو ۽ برف تي پگھلايو، مٿي ملايو ۽ هيٺ ڏنل جدول مطابق PCR رد عمل وارو نظام تيار ڪريو (برف تي هلائڻ):

نوٽ:

a) شامل ڪيل رقم سسٽم جي 1/10 کان وڌيڪ نه هجڻ گهرجي، ۽ جيڪڏهن تمام گهڻو شامل ڪيو وڃي، PCR امپليفڪيشن کي روڪيو وڃي ٿو.

تجويز ڪيل PCR شرطون

نوٽ:

a) اينيلنگ جي درجه حرارت: پرائمر جي Tm قدر جي حوالي سان، ان کي annealing گرمي پد کي پرائمر جي ننڍي Tm قدر تي مقرر ڪرڻ جي سفارش ڪئي وئي آهي +3~5℃.

عام مسئلا ۽ حل

1.نه ھدف ٿيل پٽي

1) اضافي lysis پيداوار.ٽيمپليٽ جو سڀ کان مناسب مقدار چونڊيو، عام طور تي سسٽم جي 1/10 کان وڌيڪ نه؛

2) تمام وڏو نمونو سائيز.ليسٽ کي 10 ڀيرا گھٽايو ۽ پوءِ وڌايو، يا نموني جي سائيز کي گھٽايو ۽ ري-ليسس؛

3) ٽشو جا نمونا تازو نه آهن.اهو تازو ٽشو نموني استعمال ڪرڻ جي صلاح ڏني وئي آهي؛

4) غريب پرائمر معيار.پرائمر جي معيار جي تصديق ڪرڻ ۽ پرائمر ڊيزائن کي بهتر ڪرڻ لاءِ ايمپليفڪيشن لاءِ جينومڪ ڊي اين اي استعمال ڪريو.

2.غير مخصوص واڌارو

1) annealing گرمي پد تمام گهٽ آهي ۽ چڪر نمبر تمام گهڻو آهي.اينيلنگ جي درجه حرارت کي وڌايو ۽ چڪر جو تعداد گھٽايو؛

2) ٽيمپليٽ ڪنسنٽريشن تمام گھڻو آھي.ٽيمپليٽ جي مقدار کي گھٽايو يا ٽيمپليٽ کي 10 ڀيرا وڌائڻ کان پوءِ گھٽايو؛

3) غريب پرائمر جي خاصيت.پرائمر ڊيزائن کي بهتر ڪريو.

نوٽس

1.نمونن جي وچ ۾ ڪراس آلودگي کان بچڻ لاء، ڪيترن ئي نمونن جا اوزار تيار ڪيا وڃن، ۽ اوزار جي مٿاڇري کي 2٪ سوڊيم هائپو ڪلورائٽ حل يا نيوڪليڪ ايسڊ ڪلينر سان صاف ڪري سگهجي ٿو هر نموني کان پوء جيڪڏهن بار بار استعمال جي ضرورت هجي.

2.اهو تجويز ڪيو ويو آهي ته تازو مائوس ٽشوز استعمال ڪريو، ۽ نموني جي مقدار کي تمام وڏو نه هجڻ گهرجي ته جيئن ايمپليفڪيشن جي نتيجن کي متاثر ڪرڻ کان بچڻ لاء.

3.ليسس بفر کي بار بار منجمد ٿيڻ کان بچڻ گهرجي، ۽ 2 ~ 8 ℃ تي ذخيرو ٿي سگهي ٿو مختصر مدت جي گهڻن استعمال لاء.جيڪڏهن گهٽ درجه حرارت تي ذخيرو ٿيل هجي، ورن ٿي سگهي ٿي، ۽ استعمال ڪرڻ کان اڳ مڪمل طور تي ڦهلائڻ گهرجي.

4.PCR ميڪس کي بار بار منجمد ٿيڻ کان پاسو ڪرڻ گهرجي، ۽ 4℃ تي ذخيرو ٿي سگهي ٿو مختصر مدت جي بار بار استعمال لاءِ.

5.هي پراڊڪٽ صرف سائنسي تجرباتي تحقيق لاءِ آهي ۽ ڪلينڪل تشخيص يا علاج ۾ استعمال نه ٿيڻ گهرجي.