وائرل ڊي اين اي / آر اين اي ڪڍڻ واري کٽ
هي ڪٽ اعليٰ پاڪائي واري وائرل DNA/RNA جي تيزيءَ سان ڪڍڻ لاءِ موزون آهي نمونن جهڙوڪ nasopharyngeal swabs، انوائرمينٽل swabs، cell culture supernatants، and tissue homogenate supernatants.ڪٽ سليڪا جھلي صاف ڪرڻ واري ٽيڪنالاجي تي مبني آهي جيڪا فينول/ڪلوروفارم نامياتي سالوينٽس استعمال ڪرڻ جي ضرورت کي ختم ڪري ٿي يا اعليٰ معيار جي وائرل DNA/RNA کي ڪڍڻ لاءِ وقت جي استعمال واري الڪوحل جي ورڇ کي ختم ڪري ٿي.حاصل ڪيل نيوڪليڪ ايسڊز ناپاڪيءَ کان پاڪ آهن ۽ هيٺئين دڙي جي تجربن ۾ استعمال لاءِ تيار آهن جهڙوڪ ريورس ٽرانسڪرپشن، پي سي آر، آر ٽي-پي سي آر، ريئل ٽائيم پي سي آر، ايندڙ نسل جي ترتيب (اين جي ايس)، ۽ ناردرن بلٽ.
اسٽوريج حالتون
15 ~ 25 ℃ تي اسٽور، ۽ ڪمري جي حرارت تي ٽرانسپورٽ
اجزاء
| اجزاء | 100RXNS |
| بفر VL | 50 مليل |
| بفر RW | 120 مليل |
| RNase-free ddH2 O | 6 ملي |
| فاسٽ پيور آر اين اي ڪالمن | 100 |
| جمع ٽيوب (2ml) | 100 |
| RNase-مفت ڪليڪشن ٽيوب (1.5ml) | 100 |
بفر VL:ليسس ۽ پابند ڪرڻ لاء ماحول فراهم ڪريو.
بفر RW:باقي بچيل پروٽين ۽ ٻين نجاست کي ختم ڪريو.
RNase مفت ddH2O:اسپن ڪالمن ۾ جھلي مان ڊي اين اي / آر اين اي ايلٽ ڪريو.
فاسٽ پيور آر اين اي ڪالمن:خاص طور تي ڊي اين اي / آر اين اي جذب ڪري ٿو.
جمع ٽيوب 2 ml:فلٽريٽ گڏ ڪريو.
RNase-مفت جمع ٽيوب 1.5 ml:DNA/RNA گڏ ڪريو.
درخواستون
Nasopharyngeal swabs، ماحولياتي swabs، سيل ڪلچر supernatants، ۽ ٽشو homogenate supernatants.
پاڻ تيار ڪيل مادوials
RNase-free pipette tips, 1.5 ml RNase-free centrifuge tubes, centrifuge, vortex mixer, and pipettes.
آزمائشي عمل
بايو حفاظتي ڪابينا ۾ ھيٺ ڏنل سڀني قدمن کي انجام ڏيو.
1. نموني جو 200 μl شامل ڪريو RNase-free سينٽريفيوج ٽيوب ۾ (PBS يا 0.9% NaCl سان ٺاھڻ جي صورت ۾ ناکافي نموني جي صورت ۾)، 500 μl بفر VL شامل ڪريو، 15 - 30 سيڪنڊن لاء وورٽيڪس ڪندي چڱي طرح ملايو، ۽ سينٽريفيوج مختصر طور تي مرکب گڏ ڪرڻ لاء ٽيوب جي تري ۾.
2. FastPure RNA ڪالمن کي ڪليڪشن ٽيوب ۾ رکي 2 ml.مرکب کي اسٽيپ 1 کان فاسٽ پيور آر اين اي ڪالمن ۾ منتقل ڪريو، 12,000 rpm (13,400 × g) تي 1 منٽ لاءِ سينٽرفيوج ڪريو، ۽ فلٽريٽ کي رد ڪريو.
3. FastPure RNA ڪالمن ۾ 600 μl بفر RW شامل ڪريو، 30 سيڪنڊن لاءِ 12,000 rpm (13,400 × g) تي سينٽرفيوج ڪريو، ۽ فلٽريٽ کي رد ڪريو.
4. ورجايو قدم 3.
5. خالي ڪالمن کي 12,000 rpm (13,400 × g) تي 2 منٽ لاءِ سينٽرفيوج ڪريو.
6. FastPure RNA ڪالمن کي احتياط سان منتقل ڪريو نئين RNase-free Collection Tubes 1.5 ml (ڪِٽ ۾ مهيا ڪيل) ۾، ۽ شامل ڪريو 30 - 50 μl RNase-free ddH2O ڪالمن کي ڇهڻ کانسواءِ جھلي جي مرڪز ۾.1 منٽ لاءِ ڪمري جي گرمي پد تي بيهڻ جي اجازت ڏيو ۽ 12,000 rpm (13,400 × g) تي سينٽرفيوج کي 1 منٽ لاءِ.
7. فاسٽ پيور آر اين اي ڪالمن کي رد ڪريو.ڊي اين اي/ آر اين اي سڌو استعمال ڪري سگهجي ٿو ايندڙن جي جاچ لاءِ، يا ٿوري عرصي لاءِ -30 ~ -15 ° C تي يا گهڻي عرصي لاءِ -85 ~ -65 ° C تي محفوظ ڪري سگهجي ٿو.
نوٽس
صرف تحقيق لاء استعمال ڪريو.تشخيصي طريقيڪار ۾ استعمال لاء نه.
1. نمونن کي اڳ ۾ ڪمري جي حرارت تي برابر ڪريو.
2. وائرس انتهائي متاثر ڪندڙ آهن.مھرباني ڪري سڀني ضروري حفاظتي احتياط کي يقيني بڻايو وڃي تجربو کان اڳ.
3. نموني کي بار بار منجمد ڪرڻ ۽ پگھلڻ کان پاسو ڪريو، ڇاڪاڻ ته ان سان نڪتل وائرل DNA/RNA جي گھٽتائي يا پيداوار گھٽجي سگھي ٿي.
4. خود تيار ڪيل سامان ۾ شامل آھن RNase-free pipette tips, 1.5 ml RNase-free centrifuge tubes, centrifuge, vortex mixer, and pipettes.
5. کٽ استعمال ڪرڻ وقت، ليبارٽري ڪوٽ، ڊسپوزيبل ليٽڪس دستانو، ۽ ڊسپوزيبل ماسڪ پائڻ ۽ RNase آلودگي جي خطري کي گھٽ ڪرڻ لاءِ RNase کان سواءِ استعمال ٿيندڙ شيون استعمال ڪريو.
6. ڪمري جي حرارت تي سڀني مرحلن کي انجام ڏيو جيستائين ٻي صورت ۾ بيان نه ڪيو وڃي.
ميکانيزم ۽ ڪم فلو
